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柴胡皂苷a是柴胡或狭叶柴胡的主要活性成分。柴胡是一种常用的传统中药,对其有效成分的分析有利于我们研究柴胡的药理作用,而柴胡皂苷的含量分析是药理作用研究中很重要的一部分,传统的分析检测方法如HPLC都需要比较麻烦的前处理过程。与这些常规方法相比,免疫分析方法具有选择性高、灵敏度高和特异性强等特点,在中药现代化研究中具有其特有的优势。目的：用高碘酸钠法合成柴胡皂苷a的人工抗原并进行鉴定,通过免疫小鼠制备抗柴胡皂苷a的单克隆抗体,建立三萜皂苷类化合物的免疫分析法,对柴胡皂苷a进行定性和定量分析,为含柴胡皂苷a药物及复方的质量控制、体内作用等研究提供一种技术手段。方法：利用高碘算钠法氧化柴胡皂苷a,在碱性条件下与载体蛋白如牛血清白蛋白(BSA)、多聚赖氨酸(PLL)偶联成人工抗原。考察各种影响人工抗原合成的条件。用紫外分光光度法、薄层色谱法和小鼠免疫反应对合成的抗原进行鉴定。将柴胡皂苷a (SSa)、SSa-BSA、SSa-PLL、BSA、PLL用薄层色谱法进行检测,用乙酸乙酯-甲醇-水(8：2：1)为展开剂进行展开,结束后晾干,用10%硫酸-乙醇溶液显色。用合成的人工抗原免疫Balb/C小鼠。按100μg/只的剂量取人工抗原,与等体积弗氏佐剂乳化均匀后皮下多点和腹腔注射,经过初次免疫和4次加强免疫后,尾尖取血,间接ELISA检测抗血清的效价,评价人工抗原的免疫原性；间接竞争ELISA检测抗血清的特异性。取免疫小鼠的脾细胞,用PEG法与SP2/0细胞融合,最终获得能稳定分泌抗柴胡皂苷a抗体的杂交瘤细胞,采用腹水法大量制备抗柴胡皂苷a的单克隆抗体。用生产的单克隆抗体建立柴胡皂苷a的免疫分析方法,检测该抗体的特异性、敏感性以及与其他中药活性成分的交叉反应率。结果：通过上述方法,本实验合成了可用于免疫的柴胡皂苷a的人工抗原,经鉴定,人工抗原偶联成功。免疫小鼠后得到的抗血清,间接ELISA检测效价最高达1：80000。通过细胞融合和筛选,得到了单克隆细胞株并进行抗体的生产。通过对单抗的鉴定,其检测范围为1μg/mL-500μg/mL。结论：在人工抗原的鉴定方面,薄层色谱法具有很好的优势,操作简单,节省时间,检测结果比较准确。利用柴胡皂苷a抗体建立的免疫分析方法可对含柴胡皂苷a的复方、汤剂等进行定量检测：还可以对血清、组织等生物样品中的柴胡皂苷a进行定性和定量分析,研究柴胡皂苷a在生物体内的分布和作用。