【摘 要】
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目的:通过生物信息学分析、慢性牙周炎动物模型及细胞实验探讨慢性牙周炎相关mi RNA在氧化应激中的作用机制。方法:采用加权基因共表达网络分析的研究方法系统分析Gene Expression Omnibus（GEO）数据库中GSE16134、GSE54710、GSE10334数据集,筛选牙周炎相关的靶点基因。mi Randa和Target Scan等数据库构建lnc RNA-mi RNA-m RNA
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目的:通过生物信息学分析、慢性牙周炎动物模型及细胞实验探讨慢性牙周炎相关mi RNA在氧化应激中的作用机制。方法:采用加权基因共表达网络分析的研究方法系统分析Gene Expression Omnibus（GEO）数据库中GSE16134、GSE54710、GSE10334数据集,筛选牙周炎相关的靶点基因。mi Randa和Target Scan等数据库构建lnc RNA-mi RNA-m RNA ce RNA网络。使用DAVID6.7在线网站对相关的靶基因进行GO分析和KEGG通路富集分析。利用SD大鼠构建牙周炎模型,通过观察牙龈色、形、质,结合HE及TRAP染色结果鉴定大鼠造模成功,免疫组织化学法检测大鼠牙龈中氧化应激相关蛋白HO-1、i NOS水平。ELISA法检测大鼠血浆氧化应激标志物ROS、MDA和SOD水平。体外诱导MC3T3-E1细胞成骨分化,通过茜素红染色确定其具有成骨分化功能。利用不同浓度H2O2梯度刺激具有成骨分化功能的MC3T3-E1细胞,CCK8筛选最优刺激浓度,构建MC3T3-E1细胞的氧化应激模型。RT-q PCR定量分析MC3T3-E1 mi RNA水平。结果:WGCNA确定mi R-448、mi R-515-5p、mi R-4317、mi R-142-3p为牙周炎相关mi RNAs。SD大鼠进行牙周炎造模,采用HE染色,显示牙周炎大鼠牙龈上皮固有层内较多炎性细胞浸润,牙槽骨部分吸收。TRAP染色显示牙周炎大鼠牙槽骨破骨细胞数量增多。免疫组化结果显示牙周炎组大鼠牙周组织内HO-1蛋白表达高于对照组（P＜0.05）;i NOS蛋白表达在两组间无统计学意义。选择与大鼠同源的mi R-142-3p与mi R-448-3p,RT-q PCR定量分析大鼠牙龈mi R-142-3p与mi R-448-3p水平,mi R-448-3p在牙周炎大鼠牙龈组织中的表达显著高于对照组（P＜0.05）,而mi R-142-3p在两组间并无明显无统计学意义。ELISA法分析两组血浆中氧化应激标志物水平发现,牙周炎组大鼠血浆中ROS水平显著高于对照组（P＜0.01）;SOD水平显著低于对照组（P＜0.05）;MDA在两组间差异无统计学意义。体外培养成骨细胞系MC3T3-E1并诱导其成骨分化四周,茜素红染色可见大量红染矿化结节,是成骨功能的形态学表现。0.2m M H2O2干预MC3T3-E1细胞12h,检测细胞上清中MDA、GSH-PX含量,结果显示:成骨氧化应激组MDA水平高于成骨对照组（P＜0.05）,GSH-PX水平低于成骨对照组（P＜0.05）。RT-q PCR定量分析细胞中mi R-448-3p水平,结果显示:成骨氧化应激组mi R-448-3p水平显著高于成骨对照组（P＜0.05）。结论:牙周炎大鼠体内,氧化应激水平升高与牙周炎相关;mi R-448-3p可能是牙周炎的生物标志物,其与氧化应激可能存在双向调节的关系,这有望为牙周炎的发病机制提供新的思路。
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