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自身免疫调节因子（autoimmune regulator, Aire）在胸腺髓质上皮细胞（mTECs）内能够调控外周组织自身抗原（peripheral tissue self-antigen, PTA）的表达进而诱导中枢耐受。然而，在外周淋巴组织和造血细胞内，Aire的功能还不是很明确。我们课题组前期研究表明，在稳定转染Aire的小鼠巨噬样细胞系RAW264.7（GFP-Aire/RAW）细胞内，（Toll-like receptor, TLR）1、TLR3、TLR8的表达明显升高。然而Aire影响TLR1、TLR3、TLR8表达的机制还不是很清楚。有研究报道，Aire与其协同分子DNA依赖的蛋白激酶（DNA-PK）的相互作用，是调控其转录活性的关键。因此我们推测，在巨噬细胞内，DNA-PK是否能够协同Aire作用调控TLR1、TLR3、TLR8的表达呢？为了阐明在RAW264.7细胞内Aire影响TLR1、TLR3、TLR8表达的机制，探讨DNA-PK是否能够协同Aire作用调控TLRs的表达，本课题在稳定表达Aire的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞模型和瞬时转染Aire的小鼠腹腔巨噬细胞模型的基础上，从以下几方面进行了研究：1研究DNA-PKcs与Aire的相互作用为了研究DNA-PKcs是否能够与Aire相互作用，我们采用相互免疫共沉淀和免疫荧光的方法检测RAW264.7细胞内Aire与DNA-PKcs的结合及定位情况。结果显示，在RAW细胞内，Aire能够与DNA-PKcs相互结合并与部分DNA-PKcs在细胞核中共定位。2探讨沉默DNA-PKcs后对RAW264.7细胞内Aire调控TLRs表达的影响及其调控机制为了研究在RAW264.7细胞内DNA-PKcs对Aire调控TLRs的表达是否有影响，沉默DNA-PKcs后，我们采用RT-qPCR和FCM的方法检测TLRs的表达。结果显示，在GFP-Aire/RAW细胞内，沉默DNA-PKcs后，TLR1, TLR3和TLR8的表达明显下调。利用TLRs报告基因载体进行荧光素酶报告基因的检测。结果显示，DNA-PKcs沉默后，GFP-Aire/RAW细胞内的TLR1, TLR3, TLR8的启动子转录活性明显降低。结果表明，在RAW264.7细胞内，DNA-PKcs能够协同Aire作用调控TLR1, TLR3和TLR8的表达。3探讨沉默DNA-PKcs后对小鼠腹腔巨噬细胞内Aire调控TLRs表达的影响为了进一步研究在小鼠腹腔巨噬细胞内DNA-PKcs对Aire调控TLRs的表达是否有影响，沉默DNA-PKcs后，我们采用RT-qPCR的方法检测TLRs的表达。结果显示，在pEGFPC1/Aire瞬时转染的细胞中，DNA-PKcs沉默后，TLR1,TLR3和TLR8的表达明显下调。结果表明，在巨噬细胞内，DNA-PKcs能够协同Aire作用调控TLR1, TLR3和TLR8的表达。本研究证明了在小鼠巨噬细胞内DNA-PKcs可协同Aire作用调控TLR1、3、8的表达，为阐明Aire调控TLR1、3、8表达的机制、进而影响对病原微生物和自身衰老病变细胞的识别提供实验依据，从而为Aire在外周表达的功能和意义提供了新的线索。