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目的:通过对原代海马神经元的培养及鉴定,Npn-2受体系统在原代海马神经元中的表达,为进一步研究Npn-2受体功能及为进一步研究其配体功能提供实验方法及依据。 方法:⑴取初生24小时内的Wistar大鼠,双侧海马在超净台内无菌条件下进行分离,进行原代海马神经元的培养及鉴定工作。⑵对细胞进行免疫荧光染色并使用免疫荧光显微镜观察,对观察到的细胞拍照。电穿孔转染SiRNA,使用Real-time PCR及Western Blot方法检测Npn-2受体表达量的变化。 结果:①大鼠原代海马神经元培养体系的成功建立。②Npn-2在大鼠海马神经元中的表达:大鼠原代海马神经元中,免疫荧光可以观察到细胞膜、细胞质和细胞核中均有Npn-2的表达。Npn-2 SiRNA序列的筛选:电穿孔转染Npn-2 SiRNA的3个序列和对照序列并在培养箱中放置1天,1天后用Real-time PCR的方法检测细胞。结果表明Npn2-586序列对Npn-2 RNA的抑制效率超过90%,而Npn2-1170序列,Npn2-2031序列对Npn-2 RNA有一定的抑制作用。用电穿孔转染的方法转染Npn2-586序列,Western Blot方法分别检测24、48、72小时时间点收集的细胞中Npn-2的表达。③Npn-2在48、72小时时间点的时候显著下降,而在24小时时间点的时候下降不显著。 结论:⑴成功建立体外大鼠原代海马神经元的培养体系。⑵大鼠原代海马神经元细胞中的细胞膜、细胞质和细胞核中都可以表达Npn-2。⑶Npn-2受体的表达可以被SiRNA Npn2-586序列有效的干扰,使Npn-2表达量下降。