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本研究通过对酿酒酵母中与乙醇代谢和甘油代谢密切相关的基因的遗传操作来提高酿酒酵母乙醇的产量,降低副产物甘油的产生。主要通过三条途径来研究:(1)缺失编码甘油由胞内向胞外渗透的通道蛋白Fps1p的FPS1,(2)缺失编码甘油-3-磷酸脱氢酶的GPD1和GPD2,(3)过量表达GLN1和GLT1来解决细胞内还原力问题。本文以野生型酿酒酵母菌株DC124为出发菌株,利用一步基因置换法缺失GPD1和GPD2,利用两步基因置换法过量表达GLN1和GLT1,利用遗传学原理通过不同基因型酵母细胞的融合及等位基因的分离及遗传分析得到了对FPS1, GPD1, GPD2, GLN1, GLT1五个基因进行修饰的各种组合共30株突变菌株。对菌株DC124, L-2, ZAL63, ZAL64, ZAL66, ZAL69, ZAL805, ZAL806,ZAL807, ZAL808, ZAL809, ZAL912进行发酵试验。通过对试验结果的分析发现,与野生型相比,突变株L-2 (fps1?:: LEU2 ZAL66 (fps1?:: LEU2 gpd1?::URA3),ZAL69 (fps1△:: LEU2 gpd2?::URA3), ZAL64 (gpd1?::URA3), ZAL63(gpd2?::URA3)甘油产量分别降低了17%, 23%, 51%, 17%和46%。突变株ZAL63(gpd2△::URA3)和ZAL69 (gpd2△::URA3 fps1?::LEU2)的乙醇产量较高。突变株ZAL806 (GLT1-PGK1 GLN1-PGK1)的甘油产量与野生型相比有降低趋势,但乙醇产量没有升高的趋势。GPD1和GPD2同时被缺失的ZAL809(fps1?::LEU2 gpd1?::URA gpd2?::URA GLT1-PGK1 GLN1-PGK1 )和ZAL912(gpd1?::URA3 gpd2?::URA3 GLT1-PGK1 GLN1-PGK1)这两株突变株虽然没有甘油产生,但是其乙醇产量不仅没有提高,相反,有明显下降趋势,这可能与GLN1和GLT1的表达量不足有关。本文还介绍了质粒pUC18-RYUR的构建,利用此质粒可以实现对URA3标记基因的重复利用。