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目的:本研究旨在研究MS1(9一种AG型单链寡聚脱氧核苷酸)对CpG ODN刺激RAW264.7细胞引起的HMGB1蛋白表达水平及分泌的影响,进而阐明MS19减轻H1N1流感病毒诱导的小鼠急性肺损伤模型病理损伤的治疗机制。方法:1、实验分为对照组、CpG ODN刺激组、MS19刺激组、CpG ODN+MS19刺激组,显微镜下观察各组在刺激不同时间后对小鼠RAW264.7细胞生长状态的影响。2、用实时荧光定量PCR方法检测MS19对CpG ODN刺激RAW264.7细胞HMGB1mRNA水平的影响。3、用免疫荧光法检测MS19对CpG ODN刺激RAW264.7细胞HMGB1蛋白定位的影响。4、用Western blot方法检测MS19对CpG ODN刺激RAW264.7细胞胞内HMGB1蛋白量的影响。结果:1、显微镜下观察各组刺激RAW264.7细胞不同时间后细胞的生长状态:各组细胞用CpG ODN、MS19、CpG ODN+MS19刺激RAW264.7细胞6h/12h/18h后细胞生长状态与对照组相比无明显异常,细胞均贴壁生长,密度均匀,折光度强,数量明显增多,细胞状态良好,形态大体一致,轮廓清楚。2、实时荧光定量PCR结果显示CpG ODN刺激组、MS19刺激组及MS19联合CpD ODN刺激组刺激RAW264.7细胞不同时间段后,HMGB1mRNA水平与对照组对比无明显差异。3、免疫荧光法观察MS19作用18h时对CpG ODN刺激的RAW264.7细胞HMGB1蛋白定位影响,可见CpG ODN刺激组与对照组对比,两组细胞内、外均可见绿色荧光,CpG ODN刺激组细胞外荧光强度较对照组强。MS19刺激组与对照组对比,对照组细胞内、外均可见绿色荧光,而MS19刺激组绿色荧光主要定位在细胞内及细胞膜处。CpG ODN刺激组与CpG ODN联合MS19刺激组对比,两组细胞内、外均见绿色荧光,而CpG ODN联合MS19刺激组荧光定位以细胞内为主。4、用western blot法检测胞内HMGB1蛋白量,结果显示:用相应ODN刺激48h后,CpG ODN刺激组、MS19刺激组及CpG ODN联合MS19刺激组细胞内HMGB1蛋白量与对照组比较无明显差异;刺激72h后,CpG ODN刺激组与对照组比较细胞内HMGB1蛋白减少,MS19刺激组及CpG ODN联合MS19刺激组与对照组比较细胞内HMGB1蛋白增多,CpG ODN联合MS19刺激组细胞内HMGB1蛋白量处于CpGODN刺激组与MS19刺激组细胞内HMGB1蛋白量之间。结论:1、MS19对RAW264.7细胞的细胞生长状态无明显影响。2、MS19对RAW264.7细胞HMGB1mRNA水平无明显影响。3、MS19能够抑制CpG ODN刺激RAW264.7细胞分泌的HMGB1蛋白自胞内向胞外转移。