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目的:1)分析中晚期宫颈鳞癌患者临床和病理特点,比较有无HPV感染患者临床和病理的差异,探讨HPV感染与患者淋巴结转移规律及预后特征。2)分析HPV16感染患者E1、E2蛋白抗原多肽特异性CTL免疫应答频率、强度与临床特征及预后的相关性,为宫颈癌治疗性疫苗研究提供参考依据。3)比较HPV16感染患者外周血和癌组织中CD4+、CD8+T细胞上CTLA-4、PD-1、Tim-3表达水平的差异及临床特征的相关性,分析PD-1、Tim-3共表达情况,探讨放射治疗过程中患者外周血中CTLA-4、PD-1、Tim-3表达水平的变化,为晚期宫颈癌患者联合免疫检查点抑制剂治疗提供理论基础。方法:1)收集2014年1月至2017年12月在新疆医科大学附属肿瘤医院住院治疗的中晚期宫颈鳞癌初治患者194例,记录患者基本临床病理特征、HPV感染状态及CT显示转移淋巴结情况,并对患者进行随访。2)选取第一部分研究中感染HPV16型的中晚期宫颈鳞癌患者66例和体检的60例HPV16阴性健康对照女性。使用EDTA抗凝管抽取治疗前患者和体检的健康女性外周肘静脉血15mL,分离出外周血中PBMC,采用ELISPOT试验检测患者和健康对照人群外周血T细胞对HPV16 E1、E2蛋白抗原多肽的特异性CTL免疫反应水平。3)选取HPV16型感染的中晚期宫颈鳞癌患者进行研究,共纳入63例。使用EDTA抗凝管采集患者治疗前、治疗中及治疗结束时外周肘静脉血15mL,使用活检钳采集患者入院治疗前的宫颈癌组织,分离外周血中PBMC和组织中的TIL。采用多色流式细胞技术检测外周血和癌组织中CD4+、CD8+T细胞上CTLA-4、PD-1和Tim-3的表达情况。结果:1)194例中晚期宫颈鳞癌患者中有155例检测到HPV阳性,39例患者检测HPV阴性,有淋巴结转移患者85例,无淋巴结转移患者109例。HPV阳性与阴性患者在SCC-Ag、有无淋巴结转移分组间比较,差异有统计学意义(P<0.05);SCC-Ag在HPV阳性分组中表达量高于HVP阴性组,HPV阳性组中淋巴结直径高于HPV阴性组;淋巴结分站中一站HPV阳性率87.71%,二站HPV阳性率78.57%,三站HPV阳性率100%,第三站中HPV阳性率最高;HPV阳性患者的PFS、OS与阴性患者比较,差异有统计学意义(P<0.05);HPV阳性并发生淋巴转移的患者与未发生淋巴结转移患者的PFS、OS比较,差异有统计学意义(P<0.05)。2)宫颈鳞癌患者HPV16 E1和E2抗原多肽的CTL免疫阳性反应频率高于健康对照人群,差异均有统计学意义(P<0.05),患者HPV16 E1抗原多肽的CTL免疫阳性反应强度高于健康对照人群,差异均有统计学意义(P<0.05);患者HPV16 E1特异性CTL反应频率在肿瘤分期、TSGF、淋巴结转移分组中比较,差异有统计学意义(P≤0.05);单因素分析显示,年龄是患者PFS因素,HPV16 E1反应是影响患者PFS、OS因素;多因素分析显示,年龄、淋巴结转移是影响PFS的重要因素,HPV16E1反应是患者PFS、OS重要的影响因素;从生存曲线分析HPV16 E1阳性反应组患者PFS、OS好于HPV16 E1阴性组患者。3)感染HPV16型中晚期宫颈癌鳞患者外周血中以CD8+CTLA-4+T细胞免疫检查点分子表达量最高,宫颈癌组织中以CD8+PD-1+T细胞免疫检查点分子表达量最高;宫颈癌组织中CD4+、CD8+T细胞上PD-1、Tim-3的表达高于外周血,差异有统计学意义(P<0.05);患者外周血中CD8+T细胞上CTLA-4的表达高于癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析,外周血中CD4+、CD8+T细胞上PD-1和Tim-3的表达量随着组织中表达量的增高而增高,差异有统计学意义(P<0.05);患者外周血中CD4+CTLA-4+T细胞在病理分级中分组比较,差异有统计学意义(P<0.05),外周血中CD4+Tim-3+T细胞在BMI、FIGO分期、有无淋巴结转移分组比较,差异有统计学意义(P<0.05);患者外周血中CD8+CTLA-4+T细胞在病理分级中比较,差异有统计学意义(P<0.05),外周血中CD8+PD-1+T细胞表达量在肿瘤大小分组比较,差异有统计学意义(P<0.05),外周血中CD8+Tim-3+T细胞在病理分级、有无淋巴结分组比较,差异有统计学意义(P<0.05);癌组织中CD4+Tim-3+T细胞在BMI、FIGO分期分组比较,差异有统计学意义(P<0.05);癌组织中CD8+PD-1+T细胞表达量在肿瘤大小分组比较,差异有统计学意义(P<0.05);癌组织中CD8+Tim-3+T细胞在病理分级、肿瘤大小分组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。患者外周血和组织中CD4+、CD8+T细胞上,以PD-1+Tim-3-表达量最高,通过比较发现组织中PD-1+Tim-3+、PD-1+Tim-3-、PD-1-Tim-3+T细胞表量高于外周血,差异有统计学意义(P<0.05);患者外周血中治疗前与治疗结束时CD4+T细胞上CTLA-4、PD-1、Tim-3免疫检查点分子表达量对比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1)存在HPV感染的中晚期宫颈鳞癌患者具有高SCC-Ag表达和易发生淋巴结转移的特点,宫颈鳞癌患者HPV感染与淋巴结转移规律相关,发生远处淋巴结转移的患者HPV阳性率更高,HPV阳性的患者PFS、OS差于HPV阴性患者,其中HPV阳性有淋巴结转移的患者预后更差,因此,有必要提高HPV感染宫颈癌患者抗肿瘤能力。2)中晚期宫颈鳞癌患者外周血中可以检测到HPV16 E1、E2特异性T细胞免疫反应,该免疫反应水平高于健康对照人群;HPV16 E1特异性T细胞免疫反应强度与肿瘤FIGO分期、TSGF、淋巴结转移相关,HPV16 E2特异性T细胞免疫反应强度只观察到与TSGF相关;HPV16 E1特异性T细胞免疫反应水平与患者的生存相关,HPV16 E1特异性T细胞阴性反应的患者PFS和OS更差,提示HPV16 E1蛋白可诱导宫颈鳞癌患者T细胞的免疫反应,可能是宫颈癌治疗的新的免疫靶点。3)宫颈鳞癌患者外周血和癌组织中均可检测到CD4+、CD8+T细胞表达CTLA-4、PD-1和Tim-3分子的表达;患者癌组织中CD4+、CD8+T细胞PD-1和Tim-3表达量高于外周血,外周血中CD4+、CD8+T细胞PD-1和Tim-3表达量随着癌组织中升高而升高;CD4+、CD8+T细胞表达的免疫检查点分子与BMI、病理分级、临床分期、肿瘤大小和淋巴结转移相关;患者外周血和癌组织中存在CD4+、CD8+T细胞PD-1和Tim-3共表达;放疗可引起患者机体免疫系统变化,放射治疗过程中CD4+T细胞表达的免疫检查点分子逐渐增加;为宫颈癌联合免疫检查点抑制剂治疗的使用提供指导意义。