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2型糖尿病和冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）关系密切。冠心病是2型糖尿病最主要的大血管并发症和重要的致死、致残原因之一；2型糖尿病则是冠心病的主要危险因素。最近研究发现，更是高达2/3的冠心病患者合并高血糖或糖耐量异常；糖尿病患者动脉粥样硬化不但发生早、受累病变范围广、病变程度重，而且多为伴出血和溃疡的复合斑块；至今糖尿病动脉粥样硬化的发病机制尚不完全清楚。近年来，炎症免疫反应在动脉粥样硬化及糖尿病动脉粥样硬化发生、发展中的作用日益受到关注。其炎症免疫理论的核心是：在动脉粥样硬化的危险因素/抗原如氧化修饰的脂蛋白的刺激下，激活T淋巴细胞所引起的一系列特异性细胞免疫及体液免疫反应，进一步激活效应细胞，如巨噬细胞、血小板和平滑肌细胞，从而导致炎性产物的暴增，促进动脉粥样硬化发生发展和斑块的破裂。既往研究多集中在炎症免疫的效应细胞如单核—巨噬细胞、平滑肌细胞和T淋巴细胞，而T淋巴细胞激活首先需要抗原递呈，随着体内最重要的抗原呈递和免疫应答调节细胞-树突状细胞（dendritic cells，DCs）在血管组织中的发现，DCs在动脉粥样硬化斑块形成、发展中的作用受到广泛关注。而2型糖尿病患者独特的体内微环境可能通过DCs触动和放大这种炎症和免疫反应，从而促使动脉粥样硬化发生发展，这可能是糖尿病动脉粥样硬化发生早、程度重、预后差的重要原因之一。的确，我们前期的研究发现，作为一种抗原，糖尿病患者体内的糖基化终产物可通过促进DCs分化成熟参与并放大动脉粥样硬化炎症免疫反应。因此，本项研究的目的是：进一步探讨DCs参与的炎症免疫反应在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。全文由二个部分组成：（1）以单核源性DCs作为研究对象，体外选择糖尿病患者最重要的临床特征—高血糖为干预因素，以期探讨高糖通过DCs促进动脉粥样硬化发生的可能机制；（2）观察临床2型糖尿病合并与不合并冠心病患者循环中DCs及其亚型漂移情况，探讨该类人群的异常免疫学特征，不仅对揭示糖尿病动脉粥样硬化的病理发生具有重要的意义，为其研究及防治提供新理论、新视角和新靶点，也为将来2型糖尿病合并冠心病的分子预测提供新的思路。第一部分：高糖对人单核细胞源树突状细胞分化成熟和免疫功能的影响及其机制研究目的：探讨高糖对人单核细胞源的树突状细胞（monocyte derived dendritic cells，MDCs）分化、成熟及其免疫功能的影响，进一步探索高糖在动脉粥样硬化免疫炎症反应中的作用。方法：分离人外周血单个核细胞，在含重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF，100ng/ml）和重组人白细胞介素-4（rhlL-4，20ng/ml）的完全培养基中培养；不成熟MDCs在含有5.5mmol/L D-葡萄糖、25mmol/L D-葡萄糖、5.5mmol/L D-葡萄糖+19.5mmol/L甘露醇、25mmol/L D-葡萄糖+30mmol/LN-乙酰半胱氨酸（N-acetyleysteine，NAC）及25mmol/L D-葡萄糖+10μmol/LSB203580（p38 MAPK阻断剂）的RPMI1640完全培养基中继续培养48小时后，采用流式细胞术检测MDCs表型；以MDC为刺激细胞、同种异体T淋巴细胞为反应细胞按比例混合后，以混合淋巴细胞反应强度观察对DCs抗原递呈和淋巴细胞增殖的影响；ELISA法检测细胞培养上清细胞因子浓度；利用荧光探针还原型二氯荧光素（2′，7′-dichlorodihydrofluorescin，DCFH）在共聚焦显微镜下检测MDC内活性氧水平（reactive oxygen species，ROS）；蛋白免疫印迹法检测p38 MAPK磷酸化水平。结果：与正常对照比，25mmol/L葡萄糖明显增强MDC内ROS水平（P＜0.01），显著上调MDC表面标志CD86，CD83，CD1a，HLA-DR表达、增强T淋巴细胞增殖作用（P＜0.01）并且促进MDC分泌细胞因子IFN-γ、IL-10、IL-12和IL-2（P＜0.05）：同时，p38 MAPK磷酸化水平显著增高：而氧自由基清除积剂NAC及p38 MAPK阻断剂SB203580可部分阻断高糖的上述作用。结论：高糖通过增强DCs内ROS生成及p38 MAPK活性从而促进DCs成熟、激活T淋巴细胞的能力也明显增强，并且通过促进DCs本身释放一些炎症因子，加速和放大炎症免疫反应。这可能是DCs参与糖尿病动脉粥样硬化炎症免疫反应发生的重要机制之一。第二部分：2型糖尿病合并与不合并冠心病患者循环树突状细胞亚型漂移的研究目的：树突状细胞（DCs）参与的炎症免疫反应在动脉粥样硬化的发病过程中起着重要作用。DCs的两个亚型，髓样DC（mDC）和浆细胞样DC（pDC）是重要抗原递呈和免疫调节细胞。我们假设：与单纯2型糖尿病者比，2型糖尿病合并冠状动脉粥样硬化性心脏病患者体内存在着异常的免疫应答反应，表现为循环DCs及亚型比例的改变。方法：24例2型糖尿病患者，经冠状动脉造影（CAG）检查或／和99mTC-甲氧基异丁基异腈（MIBI）单光子发射计算机断层心肌灌注显像分为单纯糖尿病组（n=11）和糖尿病合并冠心病组（n=13），以年龄匹配的健康成人作对照（n=16）。采用流式细胞仪三色分析方法测定其外周循环中DCs及其亚型的百分比和绝对数。其中DCs以Lin1-HLA-DR+确定，mDC以Lin1-HLA-DR+CD11c+确定，pDC以Lin11HLA-DR+CD123+确定；ELISA法检测外周血IL—6、hs—CRP和TNF—α水平，与mDC、pDC数量及mDC／pDC比值做相关性分析。结果：与正常对照相比，单纯2型糖尿病患者循环的DCs及亚型的总数和百分比没有显著改变；而糖尿病合并冠心病组DCs总数、百分比与单纯糖尿病组比显著减少（绝对数：1.57±0.32×107／L vs 1.19±0.54x107／L，p=0.045；百分比：0.22±0.05％vs．0.17±0.07％，p=0.029）；mDC的比例和绝对数也明显降低（绝对数：1.31±0.29×107／L vs．0.91±0.44x107／L，p=0.028；百分比：0.19±0.05％vs．0.13±0.06％，p=0.017），而pDC百分比和绝对值未见明显差别（百分比：0.05±0.02％vs．0.04±0.03％。p＞0.05；绝对数：0.33±0.19×107／L Vs．0.28±0.18×107／L，p=0.601）：mDC／pDC比值有降低的趋势，但未见统计学差异（p=0.283），进一步分析糖尿病合并不稳定性冠心病（DM+UAP）mDC／pDC比值发现，与正常对照和单纯糖尿病组比，DM+UAP患者mDC／pDC比值明显下降（p=0.022 vs Normal；p=0.047 vs DM）。mDC数量与患者血清TNF—α（r=—0.716，p＜0.001）、hs—CRP（r=—0.750，p＜0.001）及病变血管数目（r=—0.633，p=0.020）呈显著负相关，与IL—6无明显相关性（p＞0.05）；pDC数量与hs—CRP、IL—6、TNF—α及病变血管数目无明显相关性。mDC／pDC与TNF—α（r=—0.518，p=0.010）、hs—CRP（r=—0.369，p=0.019）和病变血管数目（r=—0.924，p＜0.001）亦呈显著负相关，而与IL—6无明显相关性。结论：与单纯2型糖尿病者比，糖尿病合并冠心病者循环的DCs显著减少，且DCs存在着亚型漂移，以mDC减少为主；mDC的减少程度、mDC／pDC比值降低与冠心病病变的弥漫程度及稳定性有关。这种迁移性改变可能反映了糖尿病动脉粥样硬化斑块局部Th1型免疫应答增强，与斑块的发生发展密切相关。