微生物检测是确保药品质量安全、减少临床不良反应发生的重要手段,也是寻求高效抗菌药物、解决细菌耐药问题的快捷方式。然而,受之药典常规检测方法周期长、灵敏度低、主观性强等局限,现代分析技术价格昂贵、操作复杂、不具特征专属性等不足,探索一种快速、灵敏兼具特异性的微生物检测方法成为必然。本课题依据微生物生长过程中普遍存在的能量代谢现象,建立了基于生物热动力学的微生物检测新方法,利用16SrDNA、MALDI-TOF MS、VITEK-2compact技术对其鉴定能力加以佐证。同时,为实现新建方法的推广应用,开展了临床验证、注射剂无菌检测、药物抑菌活性评价试验,以考察该方法的实用价值。结果表明基于生物热动力学的微生物检测方法不仅具有快速、灵敏、初步溯源的微生物检查效力,还可实时在线、准确定量表征药物对微生物代谢的干预过程,具有重要的应用价值和探讨意义。主要研究结果如下：1)建立一种快速灵敏、实时在线兼具生物活性指纹谱的微生物检查新方法依据微生物生长代谢过程中存在热量变化的普遍现象,采用生物热动力学法,以微生物生长速率k=0及热功率差值Pi-P0大于3倍基线噪音为评价指标,检测其热量变化规律以考察新建方法对微生物及实际样本的检测效力。结果显示,新建方法可在10h内检出规定的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌,且灵敏度均小于100CFU·mL-1;同时发现不同稀释度的同一种微生物具有基本一致的热谱曲线峰形,且具有明显的指纹特征。新建方法较常规无菌检查方法具有更高的灵敏度、更短的检测时间与潜在的指纹溯源特征。2)基于生物热动力学的微生物检测新方法应用临床微生物污染样本的热谱图与标准菌株的热谱图相似度极高,且不同微生物具有不依赖浓度变化而改变的指纹溯源特征存在,具有早期筛查微生物污染源的潜在价值。在不同灭菌处理的注射剂实际样本(复方茵陈注射液、注射用双黄连粉针、复方曲安奈德混悬型注射液)无菌检测中,未灭菌样品及灭菌不彻底样品均可在10h内检出,未灭菌样品检出时间低于灭菌不彻底样品,提示其污染程度较高。结果表明,新建方法对注射剂实际样本无菌检查具有良好的灵敏性与适用性。采用生物热动力学微生物检测技术,考察黄连碱、小檗碱及其与亚胺培南西司他丁钠联合用药对多重耐药鲍曼不动杆菌的抑菌活性。通过所获得的生物热活性谱提取微生物的生长速率、传代时间、出峰时间、最大发热功率等参数,定量监测药物抑菌活性。结果显示：黄连碱(Cop)的抑菌活性稍高于小檗碱(Ber),且两者与抗生素亚胺培南西司他丁钠之间都存在很好的协同抑菌作用。以上研究提示,生物热动力学法用于微生物检测具有快速、灵敏、初步溯源等特征,有望为其他微生物检测方法带来有益补充；通过黄连主要药效物质研究,考察其抑菌活性及与抗生素联合用药效果,为寻求既可以增强药物抑菌能力同时又可抑制细菌耐药的途径提供参考。