尼克酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)是合成NAD的关键酶。已有大量文献表明,NAMPT与许多衰老相关疾病密切相关,如肿瘤、糖尿病等。其中NAMPT大量表达于脑中的神经元,且在脑缺血过程中起保护作用。然而有许多问题仍不明确,如NAMPT在脑中的具体分布、NAMPT在老年过程中的表达变化,以及NAMPT表达和活性的变化是否与动物的神经行为相关等。在本研究中,我们发现小鼠在老年过程中,NAMPT的表达发生特异性的改变,其中皮层和海马的NAMPT水平显著下降而血清的NAMPT水平则显著增加；老年小鼠的小胶质细胞出现NAMPT表达,而年轻小鼠的小胶质细胞却不表达NAMPT;老年小鼠海马和小脑的NAD水平显著下降,而皮层和纹状体的NAD水平则没有显著改变。行为学试验显示,老年小鼠在开放场中的运动量、中心区的探索以及恐惧记忆水平都显著下降；皮层NAMPT水平与小鼠运动量正相关,而小脑和血清的NAMPT水平与小鼠运动量负相关,脑和血清的NAMPT与小鼠在开放场中心区的探索及恐惧记忆没有明显相关。因此,我们的研究展示了小鼠在衰老过程中脑和血清NAMPT表达、分布及活性的变化特征,提示NAMPT可能与动物老年过程中运动能力下降的现象有关。目的：制备和纯化重组人NAMPT和NAMPT (H247A)蛋白,并对其体外酶活性进行检测。方法：以pcDNA3.1-hnampt为模板,通过PCR扩增获得两端分别为BamHⅠ和NdeⅠ酶切位点的hnampt片断,将该片断与pET-11a(+)表达型载体连接,通过点突变获得pET-11a(+)-hnampt (H247A),以测序鉴定构建质粒。将野生型和突变型分别转化至BL21star大肠杆菌,以IPTG诱导蛋白表达,以镍柱和分子筛纯化目标蛋白,以SDS凝胶电泳和质谱鉴定目标蛋白,以核磁共振的方法检测两个重组蛋白在体外酶活性。结果：测序结果表明,pET-11a(+)-hnampt(野生型)及pET-11a(+)-hnampt (H247A)(突变型)表达载体构建成功,突变位点正确。两种蛋白均在BL21star大肠杆菌获得表达,裂解后为可溶性蛋白,通过镍柱、分子筛获得纯化蛋白,SDS凝胶电泳和质谱鉴定证明重组蛋白为分子量约56 KD的NAMPT。核磁共振体外酶活性检测发现野生型NAMPT具有酶活性,而NAMPT (H247A)的酶活性降低了约5-10倍。结论：成功获得了有体外酶活性的人NAMPT蛋白和酶活性较低的人NAMPT (H247A)蛋白,为NAMPT蛋白作用研究提供了基础。