TGF-β1对H2O2诱导的人椎间盘髓核细胞凋亡的作用研究

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目的:有关TGF-β1对椎间盘髓核细胞凋亡的作用研究甚少,且对人的髓核细胞凋亡的作用尚无研究,本研究通过建立人髓核细胞体外培养细胞株,予以双氧水诱导细胞凋亡探讨TGF-β1对人髓核细胞凋亡的影响,从而为治疗椎间盘退变提供新的理论依据。方法:本研究取材从手术台上取10例青壮年腰椎爆裂性骨折的椎间盘组织,从中分离出髓核组织并利用胰酶、Ⅱ型胶原酶消化后,成功分离出髓核细胞在DMEM/F12培养液中培养,培养成功后进行传代,采用二代髓核细胞进行实验。实验中予以H2O2诱导凋亡。研究分组分为空白对照组、TGF-β1处理组、H202处理组、H2O2+TGF-β1(lOng/ml)处理组、H2O2+TGF-β1(100ng/ml)处理组共五组,H2O2+TGF-β1(10ng/ml)处理组与H2O2+TGF-β1(100ng/ml)处理组予以H2O2诱导凋亡前以不同浓度TGF-β1预处理5小时,五组均在48小时后分别行DAPI染色免疫荧光和流式细胞仪技术检测髓核细胞的凋亡率。结果:1.通过DAPI染色发现加入H2O2后出现大量凋亡的髓核细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率为28.5%,证明H2O2诱导人髓核细胞凋亡成功;2.通过流式细胞仪检测发现10ng/mlTGF-β1处理后能使髓核细胞的凋亡率从28.5%凋亡降低为20.71%,且差异具有统计学意义(P<0.05);100ng/mlTGF-β1处理后能使髓核细胞的凋亡率降低至13.06%,与10ng/mlTGF-β1处理组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.H2O2诱导人髓核细胞凋亡后,通过对细胞凋亡形态和凋亡率的检测,发现TGF-β1可以抑制人髓核细胞凋亡,且100ng/mlTGF-β1比10ng/mlTGF-β1对人髓核细胞凋亡抑制程度更大;2.TGF-β1不能完全阻断人髓核细胞凋亡。
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