【摘 要】
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目的:提取并鉴定类风湿关节炎患者和正常人血浆来源的外泌体,探讨二者血浆外泌体形态特征及对人静脉内皮细胞增殖迁移侵袭及分泌功能的影响。方法:1、收集符合2010年美国风湿协会（ACR）/欧洲抗风湿联盟（EULAR）标准,且DAS28评分大于6分的患者血浆和正常人血浆,同时排除肿瘤、肺结核、化脓性关节炎、SLE、干燥综合征、重症肌无力、病毒性肝炎及其他自身免疫性疾病。2、用试剂盒分离外泌体后,通过透射
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（81460254）
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目的:提取并鉴定类风湿关节炎患者和正常人血浆来源的外泌体,探讨二者血浆外泌体形态特征及对人静脉内皮细胞增殖迁移侵袭及分泌功能的影响。方法:1、收集符合2010年美国风湿协会（ACR）/欧洲抗风湿联盟（EULAR）标准,且DAS28评分大于6分的患者血浆和正常人血浆,同时排除肿瘤、肺结核、化脓性关节炎、SLE、干燥综合征、重症肌无力、病毒性肝炎及其他自身免疫性疾病。2、用试剂盒分离外泌体后,通过透射电镜观察其形态特征、纳米颗粒分析仪（NTA）测量其大小及免疫印迹实验对表面标志蛋白进行鉴定。3、培养人脐静脉内皮细胞,分别用不同浓度外泌体作用于内皮细胞,通过CCK8细胞增殖实验检测内皮细胞活性;4、将患者和正常人血浆来源的外泌体及PBS分别作用于HUVECs细胞,分为PBS组、con-exo组、ra-exo组,采用蓝色枪头机械力划痕、Transwell侵袭,检测外泌体对内皮细胞迁移、侵袭能力;5、用荧光定量PCR检测细胞分泌缺氧诱导因子1a（HIF-1a）、血管内皮生长因子（VEGF）含量变化。结果:透射电镜观察到外泌体为双凹圆盘状的囊性小泡,纳米颗粒分析囊泡直径在50-150nm左右,Western blot显示出血浆外泌体表面标志蛋白flotillin1和CD81,分子量分别为47KDa和26KDa。与正常人con-exo相比,类风湿关节炎ra-exo可显著抑制内皮细胞增殖、迁移侵袭,分泌HIF-1a、VEGF细胞因子的能力也显著降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:成功提取了血浆外泌体,血浆来源的外泌体可能在RA并血管损伤中发挥重要的作用。
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