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河鲀(Puffer Fish),又名气泡鱼、吹肚鱼、连巴鱼。河鲀学术上是硬骨鱼纲(Osteichthyes)、辅鳍亚纲(Actinopterygii)、鲈形总目(Percomorpha)中所有种类的统称。我国河鲀资源丰富,河鲀鱼皮富含胶原蛋白,胶原蛋白水解产物胶原蛋白肽具有抗氧化、抑制血管紧张素转化酶活性、抑制酪氨酸酶活性、护肤、抗肿瘤等活性,是一种良好的医疗、保健产品的绿色原料来源,但目前应用于美容护肤的研究较少,亟待人们去开发鱼皮胶原蛋白肽在护肤方面的可利用价值。本研究以双斑东方鲀鱼皮为实验对象,通过单因素实验和正交实验制备得到双斑东方鲀鱼皮胶原蛋白肽(Fugu bimacuJatus collagen peptide,FBCP)并对其功效性及体外刺激性进行研究。主要研究结论如下。1、东方鲀鱼皮胶原蛋白肽提取工艺:利用碱性蛋白酶酶解双斑东方鲀鱼皮,以肽得率为实验指标,分别考察酶解温度、酶解时间、酶解pH值、加酶量、固液比等5种单因素对肽得率的影响。进一步通过正交实验,确定制备鱼皮胶原蛋白肽的最佳工艺条件:固液比1:10、酶解温度50℃、加酶量8000 U/g、酶解pH值9.0、酶解时间4 h。在此条件下,双斑东方鲀鱼皮胶原蛋白肽的肽得率为39.65%。2、双斑东方鲀鱼皮胶原蛋白肽功效性研究:选择截留分子量为10 kDa、5 kDa、1 kDa的超滤膜,将胶原蛋白肽提取液分离成不同分子量的四种组分,分别为FBCP1(Mw<1kDa)、FBCP2(1 kDa<Mw<5 kDa)、FBCP3(5 kDa<Mw<10 kDa)和FBCP4(Mw>10 kDa)。考察了四种组分的抗氧化性、吸湿性、保湿性及对细胞光损伤的保护作用等功效性。体外抗氧化实验结果表明,分子量最小的FBCP1自由基清除活性最好,其对超氧阴离子O2-·、羟基自由基·OH和二苯代苦味酰基DPPH·的清除率分别为72.85%、90.22%、82.10%,IC50分别为1.659 mg/mL、5.582 mg/mL、1.801 mg/mL。吸湿保湿试验中,FBCP1组分显示出优于其它组分的吸湿和保湿性能,相对湿度70%时,其吸湿率和保湿率分别为4.539%和0.932%,相对湿度40%时吸湿率和保湿率分别为4.125%和0.897%。体外经皮水分流失试验中,20%浓度的FBCP1组分TWEL值为8.9,保湿效果明显高于其他三组分,且其数据接近阳性对照水平,呈现良好的保湿性能。预防L929细胞UVB辐照光损伤试验中,UVB辐照使L929细胞活性下降了31.89%;与UVB组相比,辐照前添加FBCP1,L929细胞的损伤程度明显减轻,且当浓度为40 mg/mL时的细胞活力上升了60.09%,证明FBCP1具有预防L929细胞光损伤能力。修复实验中UVB组细胞活力下降31.92%,与UVB组相比,辐照后添加FBCP1,FBCP1各浓度组细胞活力均成下降趋势,且40 mg/mL浓度时细胞活力下降14.93%,证明FBCP1不具有修复L929细胞光损伤能力。3、对双斑东方鲀鱼皮胶原蛋白肽进行体外刺激性评价。EpiSkin皮肤模型刺激试验中涂抹1.5g/mL胶原蛋白肽溶液后细胞平均相对活率为93%。牛角膜浑浊渗透试验中加入1.5g/mL胶原蛋白肽溶液后牛角膜反应评分为-0.187,二者实验结果皆在无刺激评分范围内,表明双斑东方鲀鱼皮胶原蛋白肽无刺激性,具有作为化妆品原料的可行性。