阪崎肠杆菌是一种食源性致病菌,广泛分布于食品和自然环境中,目前大量病例报告表明婴幼儿配方奶粉是其主要传播途径。近些年来,由于婴幼儿配方奶粉的质量问题层出不穷,阪崎肠杆菌作为奶粉质量检测中的A类致病菌,感染后致死率高达40%-80%,受到广泛关注。目前,阪崎肠杆菌的检测方法主要以传统的生化鉴定法为主,分子生物学检测方法为辅助。但是,鉴于生化检测方法容易受到环境,实验条件和人为因素的干扰导致鉴定结果不准确、有误差；分子生物学检测方法需要专业技术人员进行操作,对实验仪器有较高要求,不利于现场检测。所以,制备一种抗阪崎肠杆菌胶体金免疫层析试纸条应用于现场检测是非常必要的。脂多糖是革兰氏阴性细菌细胞壁外侧重要的结构和功能因子,当革兰氏阴性菌侵入机体后,脂多糖作为首要靶向因子被免疫系统识别,被认为是阪崎肠杆菌最有可能的毒力因子。因此,深入研究脂多糖的结构和受体对于掌握阪崎肠杆菌的致病机理十分必要。本研究的研究内容包括：阪崎肠杆菌多克隆抗体的制备：采用标准菌株ATCC51329作为全菌抗原,通过5点法免疫白兔,提取血清,获得多抗。抗体效价为1：25600和1：12800,纯化后抗体蛋白质浓度分别为为2.7mg/mL和2.9 mg/mL。通过SDS-PAGE凝胶电泳测得多抗分子量约为194 kD。阪崎肠杆菌脂多糖的提取与纯化：选取阪崎肠杆菌为实验材料,采用热酚法和超声波破碎法提取脂多糖,纯化后的脂多糖利用考马斯亮蓝法和紫外分光光度计测定蛋白质和核酸的含量,得到脂多糖的蛋白含量低于0.5%；核酸含量介于1.47%左右,脂多糖产率分别为1.83%和0.654%；胶体金制备条件的优化：本研究在试验中优化了制备条件,通过控制pH、转速、温度及加热时间四个因素制得胶体金溶液,得到的最佳制备条件为pH为7.5、转速中速、温度在95℃时加入柠檬酸三钠和沸腾后加热时间1 min。选择金标抗体偶联的最适工作条件为：最适蛋白浓度0.018 mg/mL;标记最适pH为10；缓冲液为pH为9.8的硼酸缓冲液;抗体稀释液配方为含1%BSA和2%蔗糖的硼酸缓冲液。在此条件下成功将25 nm胶体金与多克隆抗体偶联,并能稳定保存。免疫层析试纸条的组装与评价：利用抗阪崎肠杆菌多克隆抗体,应用胶体金免疫层析技术制备免疫层析检测试纸条。采用PVC底板、NC膜、玻璃纤维、吸水垫和样品垫疫层析试纸条组装好。测试得到试纸条的菌体抗原105 cfu/mL,脂多糖的检测限为10-4mg/mL,试纸条具有良好的属间特异性,能在37℃封闭环境下加速老化60 d后使用正常,常温至少可保存8个月。