【摘 要】
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研究背景:肺癌(lungcancer)位于全球恶性肿瘤发病率的首位,每年中国的新发病例约为78.1万,居男性恶性肿瘤的首位,女性恶性肿瘤的第二位。肺腺癌(lungadenocarcinoma,LUAD)是肺癌最常见的病理类型,其发病机制至今尚不完全明确。POU结构域第4类转录因子3(POUdomainclass4transcriptionfactor3,POU4F3
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研究背景:肺癌(lungcancer)位于全球恶性肿瘤发病率的首位,每年中国的新发病例约为78.1万,居男性恶性肿瘤的首位,女性恶性肿瘤的第二位。肺腺癌(lungadenocarcinoma,LUAD)是肺癌最常见的病理类型,其发病机制至今尚不完全明确。POU结构域第4类转录因子3(POUdomainclass4transcriptionfactor3,POU4F3)又称脑特异性同源蛋白-3C(brain-specifichomeoboxprotein3C,Brn-3C),定位于人的染色体5q31-p33。多项研究表明,POU4F3在默克尔细胞癌、星形细胞瘤、子宫颈上皮内瘤变、子宫内膜癌、卵巢癌、急性髓系白血病等恶性肿瘤的发生和发展方面扮演着重要角色。POU4F3和多种肿瘤密切相关,但目前POU4F3和LUAD的关系仍然是未知的。本研究以人肺腺癌组织、LUAD细胞系和动物等为实验对象,探索POU4F3在LUAD中的作用及相关机制,为LUAD的诊断、预后和治疗提供新的思路。方法:1.免疫组织化学染色检测人肺腺癌组织芯片癌(n=122)和癌旁组织(n=118)中POU4F3蛋白的表达水平。分析POU4F3表达与LUAD患者的临床病理特征之间的关系。2.制备稳定过表达或敲低POU4F3的LUAD细胞系。过表达POU4F3的慢病毒及其对照慢病毒由吉满公司制备,将其分别稳定转染至A549和SPCA1肺腺癌细胞系;敲低POU4F3的慢病毒及其对照慢病毒由吉凯公司制备,将其分别稳定转染至A549和SPCA1细胞系。稳转细胞系经嘌呤霉素筛选并用WesternBlotting检测转染效率。3.CCK-8实验和细胞克隆形成实验检测POU4F3对体外LUAD细胞增殖的作用;裸鼠皮下成瘤实验检测POU4F3对体内LUAD细胞增殖的作用。4.流式细胞仪检测POU4F3对细胞周期的作用。5.流式细胞仪检测POU4F3对细胞凋亡的作用,WesternBlotting检测凋亡蛋白Caspase3和Cleavedcaspase3的表达水平。6.细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测POU4F3对LUAD细胞迁移的作用。鬼笔环肽荧光实验检测POU4F3对LUAD细胞微丝的作用。7.WesternBlotting检测过表达或敲低POU4F3稳转细胞系中内质网应激信号通路的关键蛋白GRP78与下游两个子通路PERK/eIF2α/ATF4/CHOP、IRE1α/XBP-1s关键分子的表达水平。结果:1.POU4F3在LUAD组织中呈低表达,POU4F3表达较高的患者总生存期较长。LUAD组织(n=122)和癌旁组织(n=118)中POU4F3的阳性率差异有统计学意义(26.23%vs.92.37%,χ2=105.6,P
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