论文部分内容阅读
目的:岩黄连提取物对A549细胞迁移及细胞骨架影响及其机制方法:体外无菌培养A549细胞,用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测岩黄连提取物在不同浓度(1mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L)分别作用48h和72h后对A549细胞生长的抑制情况。利用Wound healing实验和Transwell小室实验,比较不同浓度岩黄连提取物作用后对A549细胞迁移能力的影响。不同浓度岩黄连提取物(1mg/L、2.5mg/L、5mg/L)作用48小时后,用桩蛋白(Paxillin)一抗和鬼笔环肽罗丹明分别标记细胞黏着斑和纤维型肌动蛋白(F-actin)。利用免疫荧光技术观察细胞形态变化。利用westernblot技术观察不同浓度岩黄连提取物(1mg/L、2.5mg/L、5mg/L)作用48小时后,A549细胞内Paxillin-1和丝切蛋白1(cofilin-1)表达水平及磷酸化水平差异。Si-RNA敲除Cdc42后观察A549细胞迁移能力变化以及MAPK蛋白表达水平变化。结果:MTT实验显示,分别用1mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L岩黄连提取物处理48小时后,实验组与对照组细胞生长情况无统计学差异。而分别用1mg/L、2.5mg/L、5mg/L岩黄连提取物处理72小时情况下,实验组与对照组细胞生长情况无统计学差异。Wound healing和Transwell小室实验显示2.5mg、5mg/L岩黄连提取物处理后可以抑制A549细胞迁移能力(P<0.05)。免疫荧光结果显示随着药物浓度的增加F-actin在细胞内集聚减少,而黏着斑在细胞表面增加。Westernblot结果显示cofilin-1磷酸化水平降低(P<0.05),而cofilin-1表达水平、Paxillin-1表达水平、Paxillin-1磷酸化水平没有差异。Si-RNA敲除Cdc42后,Wound healing显示A549细胞迁移能力降低(P<0.05);MAPK蛋白表达水平没有检查出变化。结论:岩黄连提取物可以抑A549制细胞迁移能力、促进纤肌动蛋白解聚、增高cofilin-1活性;A549细胞Cdc42蛋白表达降低后会降低细胞迁移能力。