经典MHCⅠ类分子（人类为HLA，小鼠为H2）的重链包含三个细胞外结构域(a1，a2，a3)，重链与轻链(β2m)以非共价键方式结合，从而递呈抗原肽。自1998年首次发现猫视觉系统正常神经元表达MHCⅠ类分子后，其在中枢神经系统(central nervoussysten，CNS)的表达及功能研究逐渐成为神经发育及神经免疫领域的热点。近20年来的研究表明，经典MHCⅠ类分子在调控突起生长、突触可塑性及其依赖的运动学习等过程中具有重要作用。2013年，本实验室和Marcelo团队等的研究显示小鼠胚胎发育E10.5天，经典MHCⅠ类分子广泛表达于端脑泡等神经上皮，并且与nestin+神经干细胞共标，提示可能与神经发生相关。基于此，本研究选取C57BL/6小鼠，通过敲除、过表达和干扰等方法探究经典MHCⅠ类分子与胚胎期中枢神经系统神经发生的相关性。主要研究结果如下:　　1、成功构建了用于鉴定H2-DbKb-/-小鼠基因型的PCR体系。首先针对H2-DbKb-/-小鼠中被敲除的基因序列，利用primer5.0设计引物，确定最佳退火温度后，分别选取基因型明确的野生、杂合、敲除小鼠各5只，利用PCR方法鉴定引物的特异性，同时将PCR方法鉴定的结果与传统利用流式细胞仪鉴定的结果进行比较，两者完全一致，证明PCR方法鉴定结果具有可靠性。　　2、利用同窝对照小鼠，按照Birthdating的方法，在胚胎期E15.5天，腹腔注射BrdU，P0天收取组织，经基因型鉴定后进行免疫荧光染色，结果显示H2-DbKb-/-小鼠BrdU+细胞在皮层各层的分布并无明显差异;构建pCAGIG-H2-Db-myc-his质粒，体内外验证过表达后，利用子宫内胚胎电转技术在小鼠胚胎发育E15.5天皮层局部过表达H2-Db分子，E18.5收取组织，统计GFP+细胞在皮层各层的分布，结果显示并无明显差异，提示经典MHCⅠ类分子与E15.5天后的神经元放射状迁移并无明显相关性。　　3、同窝对照小鼠，胚胎发育E15.5和E17.5天分别腹腔注射20min的BrdU，收取组织经基因型鉴定后进行免疫荧光染色，结果显示H2-DbKb-/-小鼠的PH3+、BrdU+、Ki67+细胞数目减少;利用子宫内胚胎电转技术在小鼠胚胎期E15.5天的皮层局部过表达H2-Db分子，E16.5天腹腔注射BrdU，20min后收取组织，免疫荧光染色结果显示PH3+GFP+/GFP+、BrdU+GFP+/GFP+细胞数量增加，提示经典MHCⅠ类分子与增殖具有相关性;体外验证pGPU6-H2-M3-Mus质粒的干扰效率后，利用子宫内胚胎电转技术在H2-DbKb-/-小鼠胚胎发育E15.5天的皮层局部干扰H2-M3分子的表达，E16.5天腹腔注射BrdU，20min后收取组织，免疫荧光染色结果显示BrdU+GFP+/GFP+细胞数量减少，但目前仍需进一步收取相关组织进行统计。　　4、选取P0天同窝对照小鼠进行免疫荧光染色，结果显示H2-DbKb-/-小鼠的Ctip2+、Cleaved caspase3+细胞数量无明显差异，Satb2+、Oligo2+细胞数量减少，提示经典MHCⅠ类分子与胚胎期的细胞凋亡并无相关性，而影响了浅层神经元及少突胶质细胞的生成。　　以上结果显示，在小鼠中枢神经系统发育的不同时期，经典MHCⅠ类分子可能具有不同的生物学功能。小鼠胚胎发育期，表达于神经干细胞上的经典MHCⅠ类分子影响了皮层的神经发生。我们的研究将为进一步深入阐明经典MHCⅠ类分子在CNS发育过程中的作用提供实验基础，有助理于解神经系统发育异常相关疾病。