条斑紫菜多糖结构鉴定及抗疲劳活性研究

来源 :上海海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:silverfox
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条斑紫菜(Porphyra yezoensis)具有很高的营养价值和药用价值,大量资料已表明紫菜多糖具有调节免疫、抗肿瘤、抗凝血、降血脂、抗氧化等多种生物学活性。本论文主要应用生化技术对条斑紫菜多糖进行了分离纯化,从中获得一种条斑紫菜多糖纯品PY-G1,并对其一级结构进行检测分析,同时对提取纯化的条斑紫菜多糖进行了抗疲劳生物活性研究。 条斑紫菜多糖分离纯化。采用热水法制备条斑紫菜多糖提取液,经Sevag法脱蛋白和95%乙醇沉淀,最后冷冻干燥得到条斑紫菜粗多糖。条斑紫菜粗多糖经DEAE-52柱层析纯化获得2个具有不同电荷性质的多糖组分PY-D1和PY-D2,用高效液相法测定其分子量分布后,选用合适分子筛凝胶柱层析Sepharose CL-6B纯化,最后获得2个条斑紫菜多糖产品PY-G1和PY-G2,均为首次从该藻类中分离得到。高效液相法、旋光度法、紫外光度法检测结果表明PY-G1为均一多糖。 条斑紫菜多糖纯品PY-G1结构分析。采用了高碘酸氧化法、还原水解法、明胶比浊法、甲基化分析法、脱硫酸基分析等化学方法和高效液相法(HPLC)、气相色谱(GC)分析、质谱(MS)分析、红外光谱测定、NMR光谱分析等光谱学方法,对条斑紫菜多糖成分PY-G1进行了纯度及结构鉴定。结果表明:条斑紫菜多糖PY-G1样品分子量为246kDa,硫酸基百分含量为9%,为半乳聚糖,多糖链中存在1,3和1,4交替相连的重复单元,部分1,4连接的半乳糖残基6位上含有硫酸基,另一部分1,4连接的半乳糖残基3位和6位上含有内醚环。由还原水解法得到PY-G1主要由一种单糖,即半乳糖(92%)组成的,但另外含有具有取代基的3,6-内醚半乳糖(3%)和6-甲基半乳糖(5%)。由高碘酸氧化结果计算得平均每mol单糖残基消耗的高碘酸纳量为0.51mol,说明多糖的骨架主要是以1→3位连接的半乳糖,或1→4位连接的3,6-内醚-半乳糖组成,其摩尔比约为1:1。根据已有文献对PY-G1的红外图谱、13C-NMR、1H-NMR、GC-MS数据进行了归属。根据以上结果可推断:PY-G1主要由含硫酸基的前体[(1→3)-β-D-半乳糖-(1→4)-6-OSO3-α-L-半乳糖]组成,同时还存在琼胶二糖[(1→3)-β-D-半乳糖-(1→4)-3,6-内醚-2-OCH3-α-L-半乳糖]及[(1→3)-β-D-半乳糖-(1→4)-α-L-半乳糖]的重复单元,其比例约为9:9:1。此外1,4连接的半乳糖残基的2位和1,3连接的半乳糖残基6位上尚含有天然的甲氧基。 条斑紫菜多糖抗疲劳生物学活性研究。应用活体动物实验技术,通过紫菜多糖不同剂量(0,0.75 positive control,0.125,0.25,2.5,25mg/kg/d)对小鼠游泳时间、乳酸脱氢酶活性、肌糖原和肝糖原含量等指标的检测,分析了紫菜多糖提高小鼠抗疲劳生物活性功能及其量效关系。实验结果表明,紫菜多糖可显著延长小鼠游泳时间,最高可以提高37%;并且可以使小鼠在游泳前后乳酸脱氢酶含量分别增加53.5%和42.5%(P<0.05);增加小鼠肌糖原储备量和肝糖原储备量,其肌糖原储备量和肝糖原储备量最高可以分别增加165.7%和250%。这些实验结果表明,条斑紫菜多糖具有明显提高小鼠抗疲劳生物学活性。
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