针头取样结合核酸扩增技术用于肉类中污染物的检测

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食品污染物是指一些在食品生产、制造、加工、填充、包装、运输和储存过程中引入的食品以外的其它物质。食品污染物的来源主要包括食品自身存在的天然有害物、环境污染物,以及在食品加工、储存、运输、烹调等过程中带入的有害物质。肉类中残留的抗生素、重金属离子和生物胺等食品污染物被摄入后会不断地在体内积累,从而对人体健康产生严重威胁。因此,建立肉类中残留的食品污染物的高灵敏检测具有重要的实际意义。然而,上述几种污染物在肉类中的残留量一般比较少,并且受到样本量和取样方式等多种因素的影响,难以对其进行精确检测。对此,本文通过将针头取样与核酸扩增技术相结合,设计并建立了可高效、灵敏地检测常见肉类中残留的抗生素、重金属离子以及生物胺的新型传感分析方法。主要内容如下:1.针对目前高灵敏检测肉类样品中低浓度链霉素的需求和挑战,提出了一种基于核酸适配体触发杂交链式反应(HCR)高灵敏检测鸡肉中残留链霉素的比色检测法。利用针头取样结合微液相萃取技术对鸡肉样品进行取样获得目标链霉素,链霉素适配体高特异性识别链霉素触发形成具有增强类过氧化物酶活性的Fe3O4/HCR网状物。在过氧化氢和Fe3O4/HCR网状物存在的情况下,3,3’,5,5’-四甲基联苯胺可以被快速氧化变色产生紫外信号。在最佳实验条件下,该方法的检测限(LOD)低至0.509 a M(S/N=3),并成功用于鸡肉中链霉素的特异性检测,这为实际肉类样品中抗生素的精准检测提供了一种新思路。2.为了对复杂基质样品中的重金属离子进行高灵敏高特异性检测,开发了一种基于核酸适配体及HCR扩增技术用于超灵敏检测贻贝中镉(Ⅱ)离子的荧光检测法。采用针头取样结合微液相萃取技术对贻贝样品进行取样并获得目标镉(Ⅱ)离子。利用适配体特异性识别目标镉(Ⅱ)离子引发HCR过程实现目标信号的放大。利用叠氮基修饰的四苯乙烯作为荧光探针,使其与HCR产物结合然后聚集产生荧光信号。磁珠的富集作用可以使修饰有叠氮基的四苯乙烯进一步聚集对目标信号进行二次放大。该方法可以获得0.01 n M-100 n M的宽线性范围,LOD为0.171 p M(S/N=3)。此外,该方法成功应用于贻贝中镉(Ⅱ)离子的精准检测,证实了该方法的实用性和可靠性。3.开发了一种能够同时对鱼肉中的组胺和酪胺进行高特异性高灵敏检测的荧光检测法。利用核酸适配体对组胺和酪胺进行特异性识别并释放引发链,通过引发链置换出生物胺信号,再由荧光探针置换引发链信号。通过上述信号置换过程将分析物从无信号的生物胺转换为可检测的荧光信号,并通过DSN酶辅助进行信号放大提高方法的灵敏度。该方法对组胺和酪胺的LOD(S/N=3)分别为0.048 p M和0.349 p M,线性范围为1 p M至100 n M。通过适配体以及荧光探针的设计,该策略可以对鱼肉中常见的两种生物胺(组胺和酪胺)同时进行检测。这为同时、高灵敏及高特异性检测其它肉类样品中的生物胺提供了新的研究思路。
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