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目的:对蔓性千斤拔Moghania philistines药材进行星点设计-效应面法和正交设计优化其提取工艺,为蔓性千斤拔最佳工艺参数提供试验依据。建立蔓性千斤拔药材HPLC指纹图谱和两种异黄酮类成分含量测定,为科学评价和有效控制其质量以及建立其规范化生产基地提供实验依据。对蔓性千斤拔药材进行挥发性成分分析。综合提取工艺、指纹图谱、含量测定和挥发性成分分析,为蔓性千斤拔药材质量控制提供参考。 方法:(1)以乙醇浓度、提取时间和溶媒比为自变量,以染料木苷、染料木素和浸膏得率为因变量,通过对自变量的总评归一值进行多元线性回归和二项式拟合,采用效应面法优化最佳的工艺条件。(2)采用高效液相色谱法,以染料木素、浸膏收率和特征峰峰面积总和作为评判指标,通过L9(3)4正交设计试验考察乙醇浓度、溶剂倍量、回流时间和回流次数等因素对提取工艺的影响。(3)色谱柱Ultimate XB-C8柱(5μm,250 mm×4.6 mm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长254 nm,柱温35℃。(4)选择不同产地的蔓性千斤拔药材10批,用Ultimate XB-C8色谱柱(5μm,250 mm×4.6 mm),流动相为乙腈-0.1%磷酸(0~20min,3:97;20~40min,38:62;40~80min,50:50,80~95min,100:0),流速1.0mL·min-1,检测波长254nm,柱温35℃。(5)用水蒸气蒸馏法提取蔓性千斤拔挥发油,用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)对挥发性成分进行分析,并通过峰面积归一法计算各成分的相对百分含量。 结果:(1)各指标的二项式拟合方程均优于多元线性回归方程,确定回流提取工艺条件为乙醇浓度是(X1):60%~75%;溶媒比(X2)为24~26倍;提取时间(X3)为180~240min。(2)正交设计试验确定最佳工艺条件为乙醇浓度为70%,料液比为24倍,提取时间为180min,提取次数是2次。(3)HPLC指纹图谱标定了22个共有特征峰,24批次的蔓性千斤拔样本中,绝大部分是野生品,其中,有1批样本相似度大于0.9,13批样本相似度大于0.8,7批样本相似度大于0.7,因此,我们可以判断广西产的蔓性千斤拔质量是不稳定的。方法学考察结果表明,指纹图谱的精密度较高,24小时内稳定性较好,系统重现性良好,说明本法能有效控制蔓性千斤拔质量,为完善其质量评价标准提供依据,且用此法提取蔓性千斤拔量化指纹特征数据稳定、可靠。(4)染料木苷、染料木素分别0.0036~0.5400和0.0056~0.8400μg内线性关系良好,其相关系数分别为0.9993与0.9999;精密度RSD分别为2.33%和0.85%;重现性RSD分别为3.18%与1.84%,稳定性RSD分别为2.31%与0.64%;加样回收率(n=9)分别为98.9%(RSD为2.78%)和102.6%(RSD为2.81%)。(5)共提取出58个化合物,其中定性定量检测出37个,占挥发油总量的79.61%,含量最高的是β-桉叶油醇,占10.63%。 结论:通过采用星点设计-效应面法优选方法以及正交设计优化的染料木苷和染料木素提取工艺,方法简便、预测性良好。并建立了蔓性千斤拔药材的HPLC指纹图谱,为控制其质量,建立规范化千斤拔药材生产基地提供了试验依据;同时该方法操作简便,重现性良好,可为蔓性千斤拔药材的指纹图谱评价提供依据。含量测定表明HPLC测定方法简便,结果可靠,重现性较好,可作为蔓性千斤拔药材的质量控制方法。GC-MS测定的蔓性千斤拔挥发性成分表明,其挥发性化学成分与文献报道有所差异。