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目的:1.研究低浓度PCB118是否能够诱导大鼠甲状腺组织和FRTL-5细胞炎症反应;2.观察低浓度PCB118对大鼠甲状腺细胞NIS表达的影响;3.探讨低浓度PCB118通过AhR和JNK信号通路诱导甲状腺炎症反应和功能障碍的可能机制。方法:1.40只Wistar大鼠,随机均分为四组,分别以不同浓度PCB118(0、10、100、1000μg/kg/d)腹腔注射,每周5天,13周后,分离甲状腺组织,-80℃冻存或4%多聚甲醛溶液中固定备用。2.采用HE以及Masson染色,观察大鼠甲状腺组织结构变化和间质纤维化情况;运用qRT-PCR和免疫组织化学法检测各组甲状腺组织中促炎因子白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的mRNA和蛋白表达水平。3.对大鼠甲状腺FRTL-5细胞以不同浓度的PCB118(0、0.25、2.5、25 nM/L)刺激 24h 或 48h,或以 25nM/LPCB118 刺激不同时间(0、6h、12h、24h、48h)后,通过 qRT-PCR、ELISA、Western-blot 方法测定 IL-6、TNF-α 和 ICAM-1 的mRNA及蛋白表达量;Western-blot检测NIS的蛋白表达水平。4.以上述浓度PCB118(0-25 nM/L)刺激FRTL-5细胞48 h后,qRT-PCR法检测芳烃受体(AhR)与细胞色素氧化酶P450(CYP1A1)的表达量;并以AhR抑制剂α-萘黄酮(α-NF)预处理细胞,再以DMSO或25 nM/LPCB118刺激细胞24h 或 48h,qRT-PCR 和 Western-blot 测定 IL-6、TNF-α、ICAM-1 和 NIS 的表达。5.以 0-25 nM/LPCB118 刺激 FRTL-5 细胞 48 h,Western-blot 法测定 FRTL-5 细胞 JNK、p-JNK、P38、p-P38、ERK、p-ERK、c-jun、p-c-jun 的表达水平;Western-blot与免疫组织化学法观察大鼠甲状腺组织JNK、p-JNK的表达;再以siRNA干扰FRTL-5细胞JNK的表达,然后DMSO或25nM/L PCB118刺激细胞24h或48h,qRT-PCR 和 Western-blot 法观察细胞 IL-6、TNF-α 和 ICAM-1 和 NIS 的表达变化。6.利用α-NF阻断FRTL-5细胞AhR表达,再以DMSO或25 nM/LPCB118刺激细胞48h,Western-blot检测p-JNK的表达。结果:1.各组动物未见毒性相关症状,体重增长变化无明显差异(P>0.05);各组细胞活力和凋亡率无明显差异。HE染色示,PCB118暴露组出见不同程度淋巴细胞等炎症浸润,滤泡细胞增生、扩张,滤泡腔塌陷、胶质缺失等变化,在100和1 000μg/kg/d剂量组,可见弥漫炎症细胞浸润和明显结构破坏。Mαsson染色发现,PCB118呈剂量依赖性地引起甲状腺间质纤维化改变,在中、高剂量组,差异具有显著性(P<0.05)。另外,PCB118处理后大鼠甲状腺组织IL-6、TNF-α和ICAM-1mRNA和蛋白表达量显著上调,差异具有显著性(P<0.05)。2.在细胞水平,通过qRT-PCR,ELISA及Western blot法测定促炎因子表达,结果显示,低浓度PCB118以时间和浓度依赖性方式促进FRTL-5细胞IL-6,TNF-α和ICAM-1的mRNA和蛋白表达(P<0.05)。同时,PCB118处理后还可显著抑制NIS蛋白的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。3.以上述浓度PCB118刺激FRTL-5细胞后,各组细胞AhR的mRNA表达无明显差异(P>0.05),但CYPIA1的表达量显著上调(P<0.05)。以α-NF阻断细胞AhR表达后,IL-6和ICAM-1 mRNA表达被显著抑制,NIS蛋白表达量也部分恢复,差异有统计学意义(P<0.05);但α-NF对PCB118诱导的TNF-α表达无明显影响(P>0.05)。4.在细胞水平,以PCB118刺激后,FRTL-5细胞中p-JNK、p-c-jun的蛋白表达量随PCB118浓度的升高而显著上调(P<0.05),而JNK、P38、p-P38、ERK、p-ERK的蛋白表达量无明显变化(P>0.05)。在动物水平,Western-blot和免疫组织化学结果示,PCB118处理后,大鼠甲状腺组织p-JNK蛋白表达量呈浓度依赖性地升高(P<0.05);JNK蛋白表达无明显变化(P>0.05)。JNK小干扰RNA(siJNK)转染FRTL-5细胞后,再以DMSO或25nM/LPCB118刺激细胞发现,预转染siJNK后,PCB118诱导的IL-6和ICAM-1的表达显著抑制,NIS下调恢复(P<0.05);但 siJNK 未影响 TNF-α 的表达(P>0.05)。5.以α-NF预处理FRTL-5细胞后,再以PCB118刺激细胞48h后,与单独PCB118处理组相比,α-NF预处理组PCB118刺激后p-JNK表达无明显变化(P>0.05)。结论:1.低浓度PCB118可诱导大鼠甲状腺组织细胞IL-6、TNF-α和ICAM-1表达,引发甲状腺炎症反应。2.低浓度PCB1118可抑制大鼠甲状腺细胞NIS的表达。3.低浓度PCB118可通过激活AhR和JNK信号通路,介导甲状腺组织和细胞炎症反应以及功能紊乱。