水产品中酒石酸锑钾代谢产物检测技术及其在鲫鱼体内代谢转化规律的研究

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酒石酸锑钾(PAT)在我国水产养殖中曾用于寄生虫疾病的防治。由于其代谢产物-锑具有很强的毒性,农业部193号公告以及235号公告已将其归为禁用渔药之列。但由于缺乏检测标准,不能排除部分渔民会继续使用,并且锑毒性大、难代谢,对水产品质量安全有极大威胁。PAT进入生物体后立即分解为锑、酒石酸、以及钾离子。由于钾离子在生物体中属于常量元素,不能作为检测酒石酸锑钾残留指标,而酒石酸和锑在水产品本底中含量低,是酒石酸锑钾的特征代谢产物,因此,本文以检测二者残留判定是否使用过PAT。同时,由于PAT中的三价锑进入水产品后形态会发生变化,且毒性发生变化,因此有必要建立水产品中不同锑形态分析检测方法。本文通过研究建立了水产品中总锑、无机锑、无机锑中的三价锑、无机锑中的Sb(Ⅴ)以及酒石酸的检测方法;同时,对鲫鱼进行PAT药浴试验,分析了鲫鱼各组织中总锑、不同形态锑、酒石酸的含量变化,揭示了鲫鱼体内PAT富集代谢规律以及锑形态和价态转化规律,并对水产品中PAT残留检测提出了参考意见。论文研究内容主要有以下几方面:  1.建立了水产品中PAT代谢产物-锑的顺序注射-氢化物发生原子荧光(HG-AFS)检测方法。首先利用微波消解,湿法消解,微波消解结合湿法消解的前处理方法展开对水产品中总锑测定研究,同时对石墨炉-HRCS AAS、氢火焰-HRCS AAS以及顺序注射-HG-AFS三种检测技术测定总锑进行了比较,选择了微波消解结合湿法消解顺序注射-HG-AFS法检测水产品中PAT代谢产物-总锑。在该方法下,锑检测限为0.027ng/mL。空白基质加标水平0.125mg/Kg、0.500mg/Kg下的平均回收率为95.97~102.09%,RSD<6%。  2.建立了顺序注射-HG-AFS检测水产品中无机锑及其价态的方法。样品经4mol/L盐酸溶液超声浸提后加入一定量掩蔽剂、还原剂以及消泡剂在既定HG-AFS条件下测定无机锑含量。另一份相同样品中加入混合溶液(0.5mol/L硫酸混合0.5mol/L盐酸混合0.1% NaF)浸提后加入一定量掩蔽剂及消泡剂并调节样液盐酸浓度,在既定HG-AFS条件下测定Sb(Ⅲ)含量。无机锑含量减去Sb(Ⅲ)含量为Sb(Ⅴ)含量。在该方法下无机锑在0.5~40 ng/mL浓度范围内线性良好,线性相关系数为0.9991。以3SD/k计算,检出限为0.450μg/kg。6次平行测定RSD为2.31%,基质加标回收率为90.97~100.10%。Sb(Ⅲ)在0.5~40ng/mL浓度范围内线性良好,线性相关系数为0.9996,以3SD/k计算,检出限为0.400μg/kg,6次平行测定RSD为3.51%,基质加标回收率范围为84.54-89.05%。  3.建立了固相萃取-抑制电导离子色谱法测定水产品中PAT代谢产物-酒石酸的方法。在该方法下,酒石酸在80.00~1000.00ng/mL线性范围内的线性相关系数为0.9989。以3倍信噪比计算得酒石酸检出限为50μg/L,基质加标回收率介于84.39%~87.23%,RSD<6.53%。  4.研究了PAT在鲫鱼中的代谢规律以及锑形态变化规律。首先通过预实验确定PAT检测和代谢规律研究应以锑为指标;然后分析了两种PAT药浴剂量药浴24h过程中,鲫鱼各组织中总锑、无机锑、Sb(Ⅲ)以及Sb(Ⅴ)的分布和含量变化。结果表明:PAT中Sb(Ⅲ)进入机体后主要以无机锑形式存在,无机锑主要以Sb(Ⅲ)存在,肝脏是锑主要的靶器官;锑在鲫鱼中分布为肝胰腺>鳃>血液>肌肉;Sb(Ⅲ)主要在肝脏和血液中转化为Sb(Ⅴ);鲫鱼各个组织中锑的富集量对PAT药浴染毒剂量几乎不呈现剂量-反应关系,且各组织对锑的富集存在饱和现象。在80mg/L酒石酸锑钾药浴后的120d代谢过程中,鲫鱼各组织中的锑残留量及其变化表明:鲫鱼四个组织中总锑呈现下降的趋势,并且前8d代谢相对较快,8d后代谢相对较慢;四个组织对锑的代谢速度不相同,按其速率大小为肝胰腺>鳃>血液>肌肉,可见对锑富集力度越大的组织,其锑代谢速度也越快。代谢120d后,鳃、血液、肌肉中总锑残留量与背景值相差不大,但肝胰腺中总锑残留量仍为背景值的8倍左右,说明锑在肝胰腺中代谢时间较长。前40d代谢过程中,四个组织中锑主要以无机锑的形式存在,但是无机锑占总锑比例有不同程度的下降,说明部分无机锑转化为了其他形态锑;在肝脏中,随着代谢时间的延长,Sb(Ⅴ)占无机锑比例明显逐渐升高,说明在代谢过程中Sb(Ⅲ)转化为Sb(Ⅴ)的主要场所可能主要是肝脏。在富集和代谢过程中,鲫鱼各组织中不同形态锑的时间-浓度曲线都呈现出了双峰和多峰现象,说明鲫鱼对锑的富集和代谢动力学较为复杂。
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