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研究背景:目前国内供肝的灌注模式,基本都是采取先用高渗枸橼酸盐腺嘌呤液(通称肾保存液、HCA液),然后再给予UW灌注液的方式,这不同于国外直接使用UW液的方法,我国独特的供肝灌注模式是否会影响供肝的质量,对供肝的长期存活有何影响,尚未有客观的研究报道。
目的:模仿目前国内灌注取肝的方法,先用肾保存液、然后再用UW液对大鼠供肝进行灌注,探讨不同的灌注方式对供肝质量的影响并阐明其作用机制。
方法:通过体外、体内两种实验方法进行检验。体外实验为采用不同的灌注液(HCA液+UW液)冷灌注供肝,并设单纯UW液灌注作为对照组,按0、8、16、32h时间冷保存肝脏,然后检测相应冷保存时限后,经肝脏灌注的灌洗液中丙氨酸转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)的变化,并动态观察保存肝脏重量、组织学的改变;体内实验为采用kamada的双套管法,分别给予单纯UW液、及先用HCA液再用UW液灌注的方法灌注冷保存后(12、24h)进行原位肝移植,移植12小时后抽血检测反映肝功能变化的ALT、LDH,测定肝重量的变化以及肝脏病理改变。
结果:
(1)体外实验显示冷保存8h,灌注液中ALT和LDH值,三组间无显著差异性,但冷保存16、32h的ALT、LDH值对照组均明显低于实验组1、实验组2,差异有显著性;16h冷保存后肝重量差显示,实验组1、实验组2肝重量差均小于对照组,差异有显著性,但32h的肝重量三组均较保存前加重,差异无显著性;观察16、32h实验组的肝脏病理组织水肿明显重于对照组,支持前述的改变。
(2)体内实验提示冷保存12、24h的肝脏移植后,实验组的ALT和LDH值均高于对照组,组间差异有显著性;肝脏病理见肝细胞灶性核固缩,胞核体积变小,核深染固缩,细胞排列松散,支持前述的改变。
结论:体外、体内的实验均显示:先予HCA液、再用UW液的灌注模式,和单纯UW液灌注方法相比较,前者的方法在抑制肝脏水肿、维持肝细胞机能稳定等方面作用较差,且随冷保存的时间的延长,这种供肝灌注模式的负面影响更加明显。