目的:糖尿病足溃疡（Diabetic foot ulcer,DFU）是糖尿病慢性并发症。长期高血糖状态会导致外周血管病变及周围神经病变,加上机体抗感染能力下降,容易形成下肢溃疡,严重者溃疡深度可达骨髓。DFU受全身状态以及局部微环境的共同调节,愈合缓慢,严重时需截肢治疗。DFU不仅导致患者生活质量及劳动能力大大降低,还给家庭及社会带来沉重的医疗负担。Micro RNAs（miRNAs）为小的非编码RNA,在基因转录后发挥调控作用,多种miRNA被证明参与糖尿病的发生发展。本课题组既往研究发现miR-221-3p对糖尿病小鼠皮肤伤口愈合有促进作用,但具体机制尚不明确。本研究使用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）探索miR-221-3p对内皮细胞功能的影响及机制,动物实验进一步探索miR-221-3p对伤口愈合的调控机制,旨在为DFU的临床治疗提供新的治疗靶点。方法:1.正常糖浓度（NG:6 mmol/L）及高糖浓度（HG:33 mmol/L）培养HUVEC,转染miR-221-3p mimic（100 nmol/L）及NC（100 nmol/L）,采用CCK-8、Transwell及Tube Formation实验分别检测HUVEC细胞的增殖、迁移及成管能力。2.实时荧光定量PCR（q RT-PCR）、免疫组化、蛋白免疫印迹（Western Blot、WB）实验检测高糖引起的HIPK2的含量改变。3.使用HIPK2 siRNA（100 nmol/L）及si NC（100 nmol/L）转染HUVEC,采用CCK-8、Transwell及Tube Formation实验检测HUVEC细胞的增殖、迁移及成管能力。4.采用双荧光素酶基因报告实验验证HIPK2是miR-221-3p的靶基因,q RT-PCR、WB检测miR-221-3p对HIPK2表达水平的影响。5.使用HIPK2选择性抑制剂t BID验证miR-221-3p是否通过HIPK2影响HUVEC细胞的增殖、迁移及成管能力。6.正常C57BL/6小鼠制备背部全层皮肤伤口后分为两组:皮下注射NC组及注射miR-221-3p agomir组;C57BL/6小鼠通过腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病小鼠模型,制备背部全层皮肤伤口后分为两组:皮下注射NC组及注射miR-221-3p agomir组;检测miR-221-3p对皮肤伤口愈合的影响,最后留取伤口局部皮肤组织使用q RT-PCR检测miR-221-3p和HIPK2的含量。结果:1.与正常糖浓度组相比,高糖组HUVEC细胞的增殖、迁移、成管能力均下降,转染miR-221-3p mimic后HUVEC细胞的增殖、迁移与成管均有所改善,尤其在高糖状态下。2.与正常糖浓度组相比,高糖组HUVEC中HIPK2含量升高;糖尿病小鼠皮肤组织中HIPK2含量高于正常小鼠皮肤组织。3.在高糖状态下,与转染si NC组相比,转染HIPK2 siRNA组HUVEC细胞增殖、迁移、成管均增强;而正常糖浓度下使用HIPK2 siRNA降低HIPK2含量后增殖、迁移、成管无显著改变。4.双荧光素酶报告基因实验发现,正常情况下转染miR-221-3p较NC组显著抑制荧光基因强度,若对HIPK2 3’UTR区进行突变,转染miR-221-3p不能抑制荧光基因强度;q RT-PCR及WB实验显示,与转染NC组相比,转染miR-221-3p能显著降低HUVEC中HIPK2的m RNA及蛋白水平。5.HG培养HUVEC,当HIPK2选择性抑制剂t BID存在时,转染miR-221-3p mimic组与NC组相比,HUVEC细胞的增殖、迁移与成管无显著差异。6.动物实验表明,无论是正常或糖尿病模型组小鼠,与NC治疗组相比,miR-221-3p agomir治疗组小鼠的愈合率明显提高,伤口局部皮肤组织中miR-221-3p含量明显升高而HIPK2 m RNA含量明显降低。结论:MiR-221-3p通过靶向HIPK2改善HUVEC的增殖、迁移与成管功能,进而促进皮肤伤口愈合;高糖使内皮细胞中HIPK2的表达升高,高糖引起的内皮细胞功能失调与HIPK2含量变化有关。本研究证明了miR-221-3p促进伤口愈合的机制以及发现HIPK2在糖尿病伤口愈合中的新角色,为DFU的临床诊疗提供新的理论基础。