γ-氨基丁酸受体与小鼠卵母细胞成熟度的相关性研究

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目的以性成熟前雌性小鼠卵巢上不同成熟度的颗粒细胞为研究对象,测定γ-氨基丁酸(GABA)及其A型受体在小鼠颗粒细胞上的表达水平,探讨γ-氨基丁酸A型受体与小鼠卵母细胞成熟度的相关性。方法为刺激性成熟前雌性小鼠卵泡的生长,给予其腹腔内注射孕马血清促性腺激素(PMSG),并给予人绒毛膜促性腺激素(HCG)以诱发排卵,收集生发泡期(GV)和减数第2次分裂中期(MⅡ)卵母细胞周围的颗粒细胞。采用q RT-PCR技术,检测γ-氨基丁酸A型受体各个亚单位在GV期和MⅡ期颗粒细胞上的基因表达;采用Western blotting和组织免疫荧光技术,检测在GV期和MⅡ期颗粒细胞中A型受体α5亚基蛋白的表达;采用免疫组织化学技术,检测GABA在GV期和MⅡ期颗粒细胞上的表达及分布。结果(1)γ-氨基丁酸A型受体中α3、α5、β3、π、θ、δ亚基m RNA,均在小鼠GV期和MⅡ期颗粒细胞中均有所表达,其中α3、π、δ亚基m RNA在GV期颗粒细胞中的表达水平高于其MⅡ期,而β3、α5亚基在GV期的颗粒细胞中表达水平低于其MⅡ期,θ亚基在GV期和MⅡ期颗粒细胞上的表达几乎没有差异(P<0.05)(2)A型受体α4亚基仅在小鼠GV期的颗粒细胞上有少量表达,而在MⅡ期不表达,其余的A型受体α1、α2、α6、β1、β2、γ1、γ2、γ3、ε亚单位在GV期和MⅡ期颗粒细胞中均不表达(3)A型受体α5亚基蛋白在小鼠GV期和MⅡ期颗粒细胞的细胞膜和细胞质中均有表达,且其表达量随卵泡发育呈上调趋势(P<0.05)(4)根据免疫组化分析,在小鼠GV期和MⅡ期颗粒细胞胞质中均可见GABA的分布。结论GABA及其A型受体亚单位表达于小鼠不同成熟度的颗粒细胞中,其中部分A型受体α3、α5、β3、π、δ亚单位的表达变化与卵母细胞的成熟度有相关性,提示其可能参与小鼠卵泡发育和成熟的过程。
其他文献
本研究分为二部分:   第一部分、周围神经置管分次阻滞用于单侧下肢骨折手术后镇痛的临床研究   目的:观察周围神经置管分次阻滞用于下肢单侧骨折手术术后镇痛的临床效果