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本实验室分离筛选出的微嗜酸寡养单胞菌(Stenotrophomonas acidaminiphila)G1能够降解毒死蜱(CP)、甲基对硫磷(MP)、辛硫磷、二嗪磷、三唑磷(TAP)、丙溴磷。本文将编码甲基对硫磷水解酶(MPH)的mpd基因,克隆到大肠杆菌上并成功表达,然后研究了温度、pH、有机溶剂甲醇等对MPH活性的影响,比较G1菌粗酶液与构建的大肠杆菌工程菌粗酶液对CP、MP、TAP的降解效果。从G1菌中克隆长度为996 bp的mpd基因,构建重组质粒,将该质粒转化到大肠杆菌,获得基因工程菌株,成功表达重组蛋白,重组后的mpd基因编码的甲基对硫磷水解酶(MPH),经IPTG诱导表达后蛋白约30KDa,检测其酶活,重组后的蛋白能降解MP。在研究温度对MPH活性影响的时候,研究发现当温度为47℃时,底物MP的降解率最高,说明MPH最适反应温度为47℃。在pH对MPH活性影响的实验中,在碱性条件下,底物MP的降解率均高于在中性条件下,这说明MPH在碱性条件中的活性高,通过实验发现,MPH的最适反应pH为9.1。在研究有机溶剂甲醇对MPH的活性影响实验时,实验结果显示,当添加的甲醇在整个体系的体积比为6%~50%之间时,这可以提高MPH的活性,因为底物MP的降解率明显要高于不加任何甲醇的对照,当添加的甲醇体积比超过50%后,MPH的活性被抑制,底物MP的降解很少,降解率小于不添加甲醇的对照组的降解率。实验结果发现MP的降解产物PNP对MPH的活性没有影响。在G1菌粗酶液与大肠杆菌工程菌粗酶液对两种农药的降解实验中,工程菌粗酶液对CP、TAP的降解率明显高于G1菌粗酶液,这是因为构建的工程菌大肠杆菌能够大量表达MPH。在添加相同的总蛋白量时,G1菌粗酶液对CP的降解率高于对TAP的降解率。将G1菌粗酶液对MP的降解与G1菌对MP的降解结果比较,能够发现G1菌在经过16代传代后,活力明显下降,克隆的大肠杆菌因其能够大量表达甲基对硫磷水解酶蛋白,所以其对MP的降解率高。在降解实验中,当添加的工程菌总蛋白量相同时,TAP的降解率反而大于MP的降解率,这是因为MP的另一降解产物O,O-二甲基硫代磷酸对MPH有抑制作用。