柿(Diospyros kaki Thunb.)优良品种AFLP指纹图谱构建及遗传多样性研究

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该研究在建立柿AFLP分析的银染技术体系的基础上,构建了109个柿优良品种的DNA指纹图谱,对其遗传多样性进行了分析,并初步构建了柿优良品种的核心种质.1 柿树组织中富含单宁、多糖、酚及色素等物质,适于AFLP分析的柿基因组DNA提取方法为改良CTAB法,提取液为100mmol/L Tris-HCl,pH8.0;20mmol/L EDTA;1.4mol/L NaCl;2%CTAB;1%PVP40;10mmol/LNa<,2>S<,2>O<,5>;100mmol/Lβ—巯基乙醇(用前加入).采用该方法提取的柿叶片DNA,经纯化后质量和纯度较高,可用于AFLP分析.2 通过对各主要影响因素的研究,建立了适于柿树AFLP分析的银染技术体系.3 从64对引物组合(EcoRⅠ引物和MseⅠ引物个8个)中筛选出20对多态性高、谱带清晰的引物组合用于供试材料的AFLP分析.20对引物共扩增出1000条清晰可辨的谱带,其中多态性带887条,占88.7%.供试材料不同种和类型(涩柿、甜柿、君迁子、油柿和浙江柿)间多态性带所占比例不同.4 用20对引物组合构建了120份供试材料的基因型指纹,采用二岐分类法可以将供试的120份材料一一区分开,并且部分材料基因型分别拥有自己的特征带,可以作为该材料基因型鉴定的依据.5根据研究结果确定了品种划分的遗传距离,并确定五峰牛心柿、干帽盔和舟曲牛心柿为同一品种;暑黄柿与灰柿为同一品种,老皮革与舟曲火柿为同一品种,而磨盘柿和帽儿柿也为同一个品种,以上品种均为同物异名.6 聚类分析将供试材料分为两大类群和六个亚类,结果表明甜柿品种与涩柿品种在聚类结果上没有明显界限,聚类结果与品种地理来源也没有明显的联系,君迁子、油柿和浙江柿单独聚为一个亚类,与柿品种亲缘关系较远.7 采用逐步聚类分组法,以多态性带为主要指标,结合形态分类学指标及地理来源,构建了供试品种的核心种质,包括襄阳牛心柿、襄汾扁柿、老皮革、小广团柿、八月红、磨盘柿、罗阳甜柿、五花柿、鲁山牛心柿、火晶柿和南化牛心柿等11个品种,遗传多样性与形念分类学分析结果表明,所构建的核心种质符合核心种质的要求.
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