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本文对重组大肠杆菌分批-补料培养生产类人胶原蛋白的发酵条件即补氮方式(快循环补氮即间隔时间为0.5min、慢循环补氮即间隔时间为4min)、控氧方式(提高罐压、充入富氧空气、葡萄糖反馈调控)和诱导强度、诱导前后的比生长速率、代谢流分析、动力学模型及流加发酵的最优控制进行了系统的研究,结果表明: 1.最佳的发酵条件为:采用快循环补氮方式流加氮源,补料速率为3.34~5.06*103L/min;当溶氧低于20%(空气饱和度),适当提高罐压(0.3~0.8*105 Pa)维持溶氧在20%;最佳诱导条件为42℃保温2~3h,然后降温至39℃继续培养5~6h,发酵结束时细胞浓度和类人胶原蛋白的浓度可分别达68.94g/L(DCW)和13.16g/L。 2.诱导前的比生长速率影响细胞生长和类人胶原蛋白的表达,为获得尽可能多的细胞和目标蛋白,诱导前的最适比生长速率为0.15~0.20h-1;诱导后的比生长速率对表达期的细胞生长和类人胶原蛋白的表达产生显著影响,在此期间比生长速率过高或过低均不利于目标蛋白的合成,且最适比生长速率为0.04~0.05h-1,发酵结束时细胞和类人胶原蛋白的浓度可分别达69.5g/L(DCW)和13.8g/L。 3.① 诱导前的比生长速率不仅对第Ⅲ阶段的细胞生长产生影响,而且对表达期(第Ⅳ阶段)的类人胶原蛋白的合成产生影响。在第Ⅲ阶段,随着比生长速率的增大,进入磷酸戊糖(PP)途径的碳流量先增大后减小,当比生长速率为0.15h-1时达最大值,其次是0.20h-1的,以合成足够的前体和NADPH满足细胞生长所需;在诱导后,随着比生长速率的增大,进入磷酸戊糖(PP)途径的碳流量逐渐减小,而进入三羧酸循环(TCA)的碳流量随着类人胶原蛋白比产率的增大而稍有减小,以提供足够的前体和能量合成目标蛋白。代谢流分析从细胞水平阐述了诱导前的最适比生长速率为0.15~0.20h-1。② 诱导后的比生长速率对第Ⅳ阶段的细胞生长和类人胶原蛋白的合成都产生影响。在诱导后,随着比生长速率的增大,PP途径的碳流量增大,以满足细胞生长的前体和能量需求;TCA循环的碳流量随着比生长速率的增大先减少后大幅度增加,为提供目标蛋白合成所需的足够的前体和能量,0.04~0.05h-1时TCA循环的碳流量最小,且在诱导后比生长速率过大会造成极大的能量浪费,故诱导后的最佳比生长速率为0.04~0.05h-1。③ 随着发酵的进行,进入PP途径的碳流量显著减少,且从PP途径回流到EMP途径的碳流也显著减少,同时进入三羧酸(TCA)循环的碳流量显著增大,以产生足够