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本课题通过紫外诱变筛选出一株高产水溶性色素的红曲霉菌株,将其固定化并对固定化与发酵方法进行优化,在最优条件下液态培养红曲霉固定化细胞,从而提高红曲水溶性色素的产量,以适应现代化食品加工业的发展趋势。
首先平板分离实验室保留的红曲霉菌株S和风城老窖酒厂提供的红曲霉菌株F,各获得5株菌株,比较它们的产色素水平,选择凤城老窖菌株F4为出发菌株,紫外诱变2min,获得的F4018菌株水溶性色素产量最高,达到24.25U/mL,比出发菌株F4产色素能力提高了67%。然后对红曲霉菌株F4018进行性能指标的测定,确定其最适生长温度为30~35℃,最适pH值为4~6。
在上述研究结果的基础上对红曲霉菌株F4018液态培养基配方进行研究,根据正交试验结果和方差分析,确定了红曲霉菌株F4018液态发酵的最佳培养基配方:大米粉8%,NH<,4>NO<,3> 0.4%,KH<,2>PO<,4>0.2%,MgSO<,4> 0.1%,ZnSO<,4> 0.02%,MnSO<,4> 0.04%,调pH为5.5。在最优条件下对红曲霉菌株F4018进行液态培养,确定其对数生长期是第三天。
分别选用海藻酸钠、聚乙烯醇、卡拉胶和壳聚糖为固定化载体,对红曲霉菌株F4018进行包埋,分析比较这四种固定化颗粒的特性,最后选择海藻酸钙包埋法作为红曲霉菌株F4018的固定化方法。并对其固定化与发酵条件进行单因素研究,通过正交试验确定制备与发酵固定化红曲霉F4018细胞的最优条件为:采用5.0%海藻酸钠与红曲霉F4018菌株(1×10<9>个/mL)等体积混合,将5mL海藻酸钠——孢子悬液滴入到4%CaCl<,2>溶液中,制成红曲霉F4018海藻酸钙胶珠。用500mL的三角瓶装100mL培养基,接入8mL的海藻酸钠凝胶固定化细胞,摇瓶转速为180r/min,30℃下避光培养。
在优化条件下液态培养红曲霉F4018的固定化细胞和游离细胞,比较两者的发酵特性,发现固定化红曲霉F4018细胞不仅具有与游离细胞相似的前期发酵过程和色价最值,而且还表现出比游离细胞更长的平衡期,这将非常有利于色素产量的提高,为实现工业化大规模生产提供了依据。
最后,对本文研究作了总结,并对存在问题作了探讨。