第一章肝外胆管癌CXCR4表达及其临床病理特征的关系　　背景：肝外胆管癌侵袭性高，治疗效果差，根治性切除是其主要治疗方式。淋巴结转移和神经侵犯是导致肝外胆管癌预后不良的重要因素。既往报告了趋化因子及受体促进了肿瘤的增殖和迁徙，导致肿瘤转移和复发。CXCR4是趋化因子SDF-1的特异性受体，在胆管癌细胞中表达阳性，SDF-1在肿瘤侵袭的靶器官中广泛表达;CXCR4和SDF-1相互作用促使肿瘤细胞侵袭和定向转移。但是肝外胆管癌细胞表达CXCR4与其嗜神经侵犯行为的关系有待深入研究。　　目的：比较不同胆管组织CXCR4的表达差异;分析CXCR4过表达与肝外胆管癌患者临床-病理因素的关系。　　方法：收集肝外胆管癌，胆管炎及正常胆管共43例的良、恶性肝外胆管组织标本，了解不同组织CXCR4表达的差异;记录肝外胆管癌患者的临床-病理资料，分析CXCR4过表达与其临床-病理因素的关系。　　结果：CXCR4在胆管癌组织中的表达率为65.22％，在胆管炎胆管组织中的表达率为28.57％，正常胆管组织中则无CXCR4表达;CXCR4只在胆管癌组织中呈过表达。CXCR4阳性表达与胆管癌发生神经侵犯、淋巴结转移有关。　　结论：肝外胆管癌组织中CXCR4呈过表达;肝外胆管癌表达CXCR4与其发生神经侵犯及淋巴结转移相关。　　第二章肝外胆管癌细胞的体外侵袭和神经侵犯模型研究　　背景：观察肝外胆管癌嗜神经侵犯过程目前缺乏简单有效的体外模型。诱导胚胎干细胞定向分化为神经细胞，并建立神经细胞-胆管癌细胞共培养体系能够模拟肝外胆管癌细胞神经侵犯的局部微环境，用于观察其嗜神经侵袭过程。　　目的：诱导并鉴定人胚胎干细胞向成熟人神经细胞定向分化;建立胆管癌细胞神经侵犯的体外模型。　　方法：应用RA和GDNF刺激诱导胚胎干细胞定向分化为神经元和神经胶质细胞。免疫细胞染色法检测培养获得的细胞表达SYN和GFAP表达。将诱导获得的神经细胞与胆管癌细胞在Transwell小室中共培养。观察胆管癌细胞侵袭和嗜神经生长的现象; t检验比较实验组及对照组的神经细胞对胆管癌细胞的侵袭性的影响。　　结果：胚胎干细胞定向诱导4天后能获得的为神经元样细胞、神经胶质样细胞的混合细胞，分别表达SYN、GFAP阳性，成为成熟神经细胞;神经细胞-胆管癌细胞共培养模型能观察到胆管癌细胞嗜神经生长的现象，共培养组胆管癌细胞的侵袭性显著增强(p＜0.05)。　　结论：RA+GDNF诱导人胚胎干细胞可获得成熟神经元和神经胶质细胞;人神经细胞-胆管癌细胞共培养的体外模型能够模拟胆管癌神经侵犯现象。　　第三章沉默CXCR4表达抑制肝外胆管癌细胞株增殖和神经侵犯　　背景：CXCR4在多种肿瘤细胞中过表达，与肿瘤细胞的增殖、转移密切相关;SDF-1在神经细胞中表达阳性，其受体CXCR4在诱导肝外胆管癌嗜神经侵犯行为的作用机制值得深入研究。RNA干扰技术利用siRNA特异性阻断靶基因转录和翻译并促其降解，是研究基因功能的有效方法。采用RNA干扰技术有利于研究CXCR4表达在胆管癌细胞中的生物学作用。　　目的：研究沉默CXCR4对肝外胆管癌细胞增殖、侵袭和嗜神经侵犯的抑制作用。　　方法：采用Lipofectamine2000法将CXCR4-siRNA转染进入肝外胆管癌细胞，荧光显微镜下观察转染效率;Western blot和real-time PCR试验检查胆管癌细胞表达CXCR4蛋白及CXCR4-mRNA水平。Elisa法验证神经细胞表达SDF-1。神经细胞-肝外胆管癌细胞共培养实验比较实验组和对照组的胆管癌细胞侵袭及嗜神经生长情况。采用FCM检查和MTT法分别研究实验组和对照组胆管癌细胞周期和增殖的差异。　　结果：1.CXCR4-siRNA进入肝外胆管癌细胞的转染率达80％;CXCR4-siRNA能够抑制胆管癌细胞表达CXCR4蛋白及mRNA，siRNA370干扰效能最强。　　2.沉默CXCR4显著抑制肝外胆管癌细胞的嗜神经侵犯能力(p均＜0.05)。　　3.沉默CXCR4可以显著促进肝外胆管癌细胞的凋亡，沉默CXCR4表达的胆管癌细胞增殖力下降，但与对照组比较，差异并不显著。　　结论：抑制肝外胆管癌细胞表达CXCR4，能显著降低其侵袭性和嗜神经生长能力，诱导肝外胆管癌细胞凋亡并降低胆管癌细胞的增殖能力。