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番木瓜[Pawpaw,Carica Papaya L.]属番木瓜科番木瓜属植物,在我国广东省广泛种植,在我国,番木瓜和番木瓜叶在古代已经被作为药材用于消炎止痛。目前国内外对番木瓜叶药理活性研究的相关报道较少,本文将对番木瓜叶黄酮的种类、黄酮类物质的抗氧化、抗癌、抑菌和消炎活性进行初步研究,为进一步提高番木瓜的经济和药用价值,进行深加工,开发高效价的药用或保健新产品提供科学依据。
论文的主要内容和结果如下:
(1)对从番木瓜叶中提取、纯化总黄酮的工艺进行了优化。在单因素实验的基础上,采用L9(34)正交实验研究了乙醇浓度、浸提温度、浸提时间和料液比对番木瓜叶总黄酮提取率的影响,同时确定了乙醇溶液提取番木瓜叶总黄酮的最佳工艺条件:乙醇浓度50%,浸提温度70℃,浸提时间2 h,料液比1∶20,提取3次。
(2)筛选出番木瓜叶乙醇提取物抗氧化抗癌活性最强萃取部分(乙酸乙酯部),并研究其抑菌活性。①采用MTT比色法测定了番木瓜叶乙醇提取物各个萃取部位对肝癌细胞生长的抑制情况;采用分光光度法测定了番木瓜叶各个萃取部分对DPPH自由基的清除能力。实验结果表明,番木瓜叶乙醇提取物乙酸乙酯萃取部为抗氧化抗癌活性最强的萃取部分。②采用牛津杯法、最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定方法,测定了不同浓度番木瓜叶乙酸乙酯萃取部溶液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌活性,结果表明,番木瓜叶乙酸乙酯萃取部对三种细菌增殖的抑制能力大小顺序为:金黄色葡萄球菌>枯草芽孢杆菌>大肠杆菌。
(3)利用聚酰胺对番木瓜叶提取物乙酸乙酯萃取部分进行纯化,然后用硅胶对纯化片段进行分离,得到番木瓜叶三种黄酮化合物单体。①经过对不同目数聚酰胺的筛选,确定60~80目的聚酰胺的吸附和解吸综合效果最佳。经过对上样浓度、上样流速、解吸液浓度和解吸流速的单因素实验,确定了最佳的吸附工艺参数:上样浓度1.5 mg/mL,上样流速2 mL/mim洗脱工艺参数:乙醇浓度80%,洗脱流速2 mL/min。②利用聚酰胺对番木瓜叶提取物的乙酸乙酯萃取部分进行纯化后,将纯化物进行硅胶层析分离,获得黄酮类化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ。③通过核磁共振(NMR),红外吸收(R),高分辨质谱(HRMS)和紫外吸收(UV)等仪器进行鉴定并参考相关文献,最终鉴定各黄酮类化合物单体分别(+)-儿茶素(Ⅰ)、山奈酚(Ⅱ)和槲皮素(Ⅲ),均为番木瓜叶中首次分离发现。
(4)采用MTT比色法测定了三种黄酮类单体化合物和番木瓜叶乙酸乙酯部对肝癌细胞增殖的影响。结果表明:①化合物表(+)-儿茶素(Ⅰ),山奈酚(Ⅱ)和槲皮素(Ⅲ)对肝癌细胞的抑制能力和浓度呈现正相关性,其中,槲皮素的抑癌活性最强,在800 μg/mL浓度下,它对肝癌细胞的抑制率为67.47%;②三种黄酮化合物在实验中并没有体现出明显的协同作用;③黄酮类物质的抗癌能力大小可能与酚羟基的数目和B环上是否存在邻位酚羟基有关,其中B环上的邻二酚羟基对黄酮类物质的抗癌能力可能起到决定性作用。
(5)采用分光光度法测定了三种黄酮类单体化合物的还原能力,抗氧化能力和消炎能力。结果表明:①三种黄酮类单体化合物在抗氧化和消炎实验中均表现可很强的活性,其中槲皮素均表现出最强的抗氧化和消炎活性;②三种黄酮化合物在实验中并没有体现出明显的协同作用;③黄酮类物质的抗氧化和消炎活性强弱可能与其C环上的双键数和B环上C3位置的酚羟基有关,其中,C环上的双键数目对黄酮类物质的消炎能力可能起到决定性的作用。