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目的:布病(Brucellosis)是一种严重危害人和动物健康的人兽共患传染病。巨噬细胞是布鲁菌生存和繁殖的靶细胞之一,布鲁菌的胞内生存与抑制宿主细胞凋亡有关,外膜蛋白OMP25(OuterMembrane Protein25)在布鲁菌的毒力及胞内寄生中起重要作用。前期,本课题组应用噬菌体展示技术筛选出与布鲁菌OMP25特异性结合的42个环形七肽,通过生物信息学分析,LT-7C与锌指蛋白ZNF446(Zinc Finger Protein Peptide446)对应区域有100%的同源性。本研究以布鲁菌RB51(Brucellaabortus strain RB51)侵染THP-1(human leukemia cell line)细胞,研究LT-7C在不同阶段对MAPK通路(MAPK signal pathway)的影响,进而探讨LT-7C对细胞凋亡的影响。方法:本研究利用合成的环形七肽与THP-1共孵育,采用MTT法进行多肽的毒性检测,选择合适的七肽浓度与THP-1共孵育,实验设未感染组和感染组,包括未感染对照组、未感染线性七肽组、未感染环形七肽组、感染对照组、感染线性七肽组和感染环形七肽组。以MOI(multiplicity of infection)为50:1建立RB51感染THP-1细胞的感染模型。分别收集4、8、12、24h和48h的感染细胞,利用流式细胞仪检测不同时间段的早期凋亡率;感染4h和48h时,曲拉通裂解细胞,进行细胞内布鲁菌计数;采用qRT-PCR技术和Western blot检测4h和48h MAPK通路中ERK1/2、JNK1/2、P38的mRNA水平和蛋白的表达变化。结果:(1)合成的环形七肽对THP-1无毒副作用;(2)流式细胞术检测显示:在未感染组中环形七肽组和线性七肽组与对照组比较早期凋亡率随着时间的变化呈上升趋势,统计学分析各组差异无统计学意义(P>0.05);在感染组中环形七肽组和线性七肽组与感染对照组比较12h前呈上升趋势,12h后呈下降趋势,其中4h时感染环形组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);48h时感染环形组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)CFU计数结果显示感染环形七肽组早期4h时胞内细菌量低于感染对照组,并且差异有统计学意义(P<0.05);线性七肽组4h胞内含菌量高于感染对照组,差异无统计学意义;48h时各组差异无统计学意义。(4) qRT-PCR检测结果显示4h时感染线性组LT-7组和感染环形LT-7C组erk1的拷贝数低于感染对照组,ekr2、p38、jnk1和jnk2拷贝数在各感染组无变化,未感染组4h时各基因的拷贝数无变化;48h时感染环形组中jnk1/2拷贝数低于感染对照组;erk1、ekr2、p38拷贝数在各感染组无变化,未感染组48h时各基因的拷贝数无变化;(5)Western blot结果与qRT-PCR一致。结论:(1)以MOI为50:1的RB51感染的环形七肽组中,环形七肽4h时有抑制胞内入侵作用,48h时其对胞内入侵无作用。(2)环形七肽组4h时ERK1/2的低表达与凋亡率增高有关,48h时JNK1/2的低表达与凋亡率降低有关。