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【目的】探索双硫仑对TGF-β诱导的乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231上皮间质转化的影响及可能的作用机制。【方法】1.体外培养人乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231,MTT法检测双硫仑对细胞的毒性作用;根据MTT结果选定DSF工作浓度。2.实验细胞分组:对照组、TGF-β组、不同浓度双硫仑+TGF-β组。3.观察DSF对TGF-β诱导的EMT的抑制作用:通过光镜观察细胞形态;应用免疫荧光、Western blot检测EMT相关标记分子(E-cadherin、Vimentin、N-cadherin)的表达。4.通过划痕实验、Transwell小室迁移实验及Matrigel侵袭实验检测DSF对乳腺癌细胞迁移能力的影响。5.Western blot检测NF-κB、ERK、p-ERK、Snail的表达,明确DSF对ERK/NF-κB/Snail通路的抑制作用;用ERK抑制剂U0126作用于乳腺癌细胞,证实DSF通过抑制ERK/NF-κB/Snail通路对细胞EMT发挥抑制作用。【结果】【结果】1.DSF抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖,在一定浓度范围内随着DSF浓度增加其抑制作用增强。实验浓度范围内抑制率在25%以下,这表明DSF对下述细胞功能的影响并非因细胞毒作用而引起。2.TGF-β诱导乳腺癌细胞发生EMT,其细胞形态由典型的极性、鹅卵石的上皮样细胞变为非极性、梭形的间质细胞,而DSF+TGF-β组中随DSF浓度增加,细胞形态逐渐由间质形态向上皮形态转变。TGF-β组中E-cadherin表达下调,N-cadherin、Vimentin表达上调;而DSF的加入抑制了TGF-β对E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的作用,且这种抑制作用随DSF浓度增加更明显。3.在侵袭迁移实验中,TGF-β促进细胞的侵袭和迁移,而这种作用被DSF所抑制。4.TGF-β组中NF-κB/P65活性上调且ERK、Snail的表达增强,而DSF则明显抑制NF-κB活性,下调ERK/NF-κB/Snail通路。5.U0126是MEK1/2抑制剂,它能抑制ERK/NF-κB/Snail通路,从而阻遏TGF-β诱导乳腺癌细胞发生EMT。【结论】1.DSF对TGF-β诱导的乳腺癌细胞EMT具有抑制作用。2.DSF对TGF-β促进乳腺癌细胞的迁移、侵袭具有抑制作用。3.DSF抑制NF-κB活性,下调ERK/NF-κB/Snail通路。4.阻断ERK/NF-κB/Snail通路可以抑制TGF-β诱导乳腺癌细胞发生EMT。5.乳腺癌细胞中,DSF通过抑制ERK/NF-κB/Snail通路发挥对TGF-β诱导的EMT的抑制作用。