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聚合酶链反应(PCR)是一种体外扩增目的基因片段技术,这种技术可在几小时内将目的基因片段扩增107-108倍。单链构象多态性分析(SSCP)是一种聚丙烯酰胺电泳技术,此方法根据核酸分子的构象差异可以将相差一个碱基的单链DNA或RNA片段分离开。 我们应用PCR-SSCP技术对急性髓细胞白血病(AML)患者的N-ras基因点突变进行了筛选,并对突变患者进行临床完全缓解(CR)后的随访检测。 首先应用二次PCR-SSCP方法对N-ras基因点突变为微量残留白血病细胞(MRLC)检测标志的敏感度进行了测定。HL-60细胞系具有N-ras 61位密码子点突变,将其DNA与正常人DNA进行系列稀释,第一次PCR进行50μl体系的非同位素对称PCR,SSCP后将突变位置单链凝胶切下进行电洗脱。洗脱后再取5μl模板进行第二次同位素不对称扩增,PCR后再次SSCP。此方法的MRLC检测敏感度为10-6。第二次PCR时,将与突变单链来自同一引物延伸所得正常单链连续用水稀释,也取5μl进行同位素不对称PCR。此正常单链的稀释度(指数形式)与相应区带的密度扫描值近似直线关系,以此为标准曲线。第二次SSCP后,相同稀释度(用正常人DNA稀释)HL-60 DNA单链的密度扫描值与标准曲线相差不到2倍。 对17例AML患者进行了包括12/13位密码子的突变筛选,其中5例阳性(29%);对51例AML患者进行了包括61位密码子的突变筛选,其中13例阳性(26%)。总突变率55%,有1例复合突变。 对2例61位密码子片段阳性者进行了完全缓解(CR)后MRLC检测。1例3疗程后MRLC为10-4,6-7疗程后MRLC在10-6以下,说明随着疗程数的增加,