葡萄DNA指纹数据库的构建及品种鉴定

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葡萄是我国重要的经济作物之一,优良品种的选育对改善葡萄品质和提高种植效益起着至关重要的作用。然而随着新品种选育技术的同质化,使得葡萄品种之间的遗传差异越来越小,完全依据形态特征区分植株显得越来越困难。近年来,随着生物技术的发展,应用DNA分子标记技术构建DNA指纹数据库成为葡萄品种鉴定的一项关键技术。该技术作为植物DUS(Distinctness,Uniformity,Stability)测试的一种辅助工具,可以提高近似品种筛选的效率和准确性,进而加快测试进程。本研究以SSR分子标记为技术手段,以我国296个葡萄品种为试材,利用筛选出的一套多态性较高的SSR核心引物对其进行了DNA指纹数据库的构建,为葡萄品种鉴定及亲缘关系分析提供了科学依据。主要结果如下:1.以24份遗传差异较大的葡萄品种为试材,从140对SSR引物中筛选出38对多态性高、稳定性好、带型清晰的SSR引物,其中包括国际通用的9对SSR引物,并利用该9对引物进行葡萄DNA指纹数据库的构建、品种鉴定及遗传多样性分析。2.所利用的9对SSR引物在296个葡萄品种中共检测到208个等位位点,其中多态性位点为208个,多态性比率为100%。每个SSR位点检测出的等位位点变幅为17-32个,平均值为23.11,扩增产物片段大小的变幅为121-289 bp,每个位点的基因型个数变幅为64-116,多态性信息含量变幅为0.77-0.88,平均值为0.83。3.UPGMA聚类分析表明,243份二倍体供试材料可被分为真葡萄亚属和圆叶葡萄亚属两大类,而真葡萄亚属又被分为8个野生种类群和2个栽培种类群。53份四倍体供试材料被分为3组,聚类结果与供试材料已知的系谱来源基本吻合。4.本研究用9对SSR引物对61份中国地方品种进行鉴定分析,发现其中存在3组同名异物品种和9组疑似同物异名品种,例如,红葡萄-新疆与红葡萄、绿木纳格与木纳格、伊犁葡萄与和田红、黑葡萄-新疆与紫红型葡萄等。5.利用筛选的9对SSR核心引物初步构建了296个葡萄品种的DNA指纹数据库。由指纹数据库可知,利用其中7对引物,即VVMD28、VVMD7、VrZAG79、VrZAG62、VVS2、VVMD27、VVMD32,便可将296个葡萄品种基本区分开。
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