大白菜耐热性基因的SRAP分子标记

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本研究以不同生态型的大白菜耐热自交系‘413’和热敏自交系‘96’为亲本配制杂交组合,得到了耐热性状产生分离的F2代群体,亲本和F2代群体作为试验材料。首次利用SRAP分子标记的方法进行了大白菜耐热性状的分子标记研究。利用亲本基因池对304对SRAP引物组合进行初步筛选,利用耐热基因池和热敏基因池对通过初步筛选的SRAP引物组合进行进一步的筛选,将通过进一步筛选的引物组合用耐热基因池和热敏基因池里的单株进行验证。最后获得了一个与大白菜耐热性基因连锁的SRAP标记,并对这个SRAP标记进行了回收测序,运用NCBI的在线Blast工具,在核酸数据库中进行了序列的比对并对比对结果进行了相关的分析。试验结果如下:1.对大白菜F2代群体幼苗热害等级的调查数据进行了分析,该调查数据符合正态分布,说明耐热性状是由多基因控制的数量遗传性状。2.确立了大白菜SRAP-PCR最佳反应体系,反应体系(20μl)为:dNTPs 0.25mM, Mg2+1.25mM, Primer0.5μM, Taq酶2.5U,模板25ng。3.用亲本基因池对304对引物组合初步筛选,共有10对引物组合没有扩增出条带,其余多态性均较好,其中有160对引物组合能扩增出差异带。4.用耐热和热敏基因池对通过初步筛选的引物组合进一步筛选,得到36对能产生差异带的引物组合。其中只有一对引物组合(ME13EM2)通过了耐热和热敏基因池中单株的验证,即得到了一个SRAP标记。该标记和耐热基因之间的交换值为16.7%,说明两者之间连锁较紧密。5.得到一个实际长度为186bp的目的片段序列。该序列与大白菜叶绿体序列、甘蓝型油菜叶绿体基因中的ATP合酶β亚基(atpB)基因序列和与萝卜、黄瓜叶绿体ATP合酶β亚基(atpB)的mRNA序列的最大序列相似度均为96%。因此推测该序列与ATP的合成有关。
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