论文部分内容阅读
高效药物是人类治疗和预防疾病的主要途径,其活性成分筛选方法的建立一直是医学、药学和化学等领域的前沿研究问题。本论文以药物活性成分高效筛选为目的,建立了定向固定化β-肾上腺素受体(β2-AR)亲和色谱,并将其应用于麻黄活性成分筛选及作用机制研究；以模式动物斑马鱼为模型,研究了丹参素异丙酯促血管新生作用。全文共分四章,作者的主要贡献如下：1.以β2-AR为例,建立了基于定向固定化β2-AR亲和色谱的麻黄活性成分高效筛选方法。通过基因重组方法将组氨酸标签重组至受体结构中,利用融合蛋白质标签中高密度的咪唑基,通过重氮盐反应将其定向固定在大孔硅胶表面,建立定向固定化β2-AR亲和色谱。结果表明,重氮盐法蛋白键合量为200.17+7.47pmol/g,麻黄中与β2-AR有特异性作用的活性成分为麻黄碱。与传统随意固定化方法相比,该方法能有效减少固定化过程蛋白质活性位点损失,统一蛋白质取向及构象,有望为中药活性成分的高效筛选提供新方法。2.以定向固定化β2-AR亲和色谱为模型,利用竞争置换方法研究了盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱与β2-AR的相互作用机制。结果表明,两种药物在固定化受体表面的等温吸附过程符合朗格谬尔模型,在β2-AR生物色谱柱只存在一类结合位点。37℃时,盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的结合常数分别为(5.94±0.05)×103/M和(3.80±0.02)×103/M,结合位点数均为(8.92±0.06)×10-4M。热力学研究表明,两种药物与β2-AR的结合是自发放热过程,静电作用是药物与β2-AR之间作用的主要推动力,为药物-受体相互作用研究提供了新方法。3.以模式动物血管荧光转基因斑马鱼TG (VEGFR2:GFP)为模型,研究丹参素异丙酯的促血管生成作用。用PTK787(生长因子酪氨酸激酶抑制剂)制造血管损伤模型。结果表明：与对照组相比,丹参素异丙酯在0.01-1.0μM范围内对PTK787诱导的斑马鱼血管损伤具有显著的拮抗作用,血管相对生成率分别为32.0±0.6%,41.1±5.6%,52.4±0.7%,证明丹参素异丙酯具有良好的促血管生成作用,且呈剂量依赖关系。