自主性细小病毒H1(PVH1)具有选择性杀伤肿瘤细胞和转化细胞的特性，而对正常细胞无可见的影响。因为这一特性，细小病毒及其重组载体不仅被应用于抗肿瘤治疗研究，而且可作为选择压力从肿瘤细胞和转化细胞中筛选对其具有抗性的细胞：这些抗性细胞在基因表达水平上区别于其母本细胞，其恶性程度减轻或者更接近正常细胞。因此，对细小病毒抗性细胞及其母本细胞的基因表达谱进行比较，即分析接近正常的细胞(实验组)与转化细胞(母本细胞，对照组)之间m刚A表达水平的差异，可以对肝细胞的转化及肿瘤发生的分子机制得到更深入的了解，同时有可能找到这一过程中的关键基因，为肝癌的研究和治疗寻找新的思路和靶目标。 本研究采用寡核苷酸芯片方法研究人肝转化细胞L02及其细小病毒H1抗性细胞克隆间基因表达谱的差异。首先，PVH1敏感的细胞株L02及QGY-7703(肝癌细胞株)，经感染病毒、平板克隆及扩增得到抗性细胞克隆。从获得的抗性细胞克隆中初步挑选出形态及生长状态稳定的细胞克隆，与母本细胞进行细胞学、病毒感染后存活率比较及裸鼠成瘤等实验研究，验证其在恶性程度方面的差异。然后，采用GenechipHumanGenomeu133plus2．0(Affymetrix)对L02细胞及其抗性细胞(L02vsRcR50，L02C3vsc3RCl)进行表达谱芯片实验，并用SYBRGreenReal-timePCR对6个表达变化明显基因进行验证。 结果显示：实验组细胞与对照组细胞相比，其上调的细胞基因数目远大于下调的基因数目；其中，共同表达上调的基因有32个(其中变化显著(SLF≥2)的有5个：共同表达下调的基因有7个，其中变化显著(SLF≥2)的有一个。这提示接近正常的细胞(实验组)比转化细胞(对照组)的基因表达谱整体上调，即表达基因更多。这些基因的表达变化与很多信号通路和生物学过程有关，但与同一信号通路或生物学过程相关的基因数目较少，说明变化可能受调控基因综合影响，而不是由单独一条或几条已知信号通路或生物学过程所决定。 表达变化的已知基因中，信号转导及依赖D№的转录调控等基因占很大比例，说明两组细胞在基因组转录水平上，的确发生了较大改变；细胞黏附和细胞迁移等与肿瘤转移有关的基因表达也有较大改变；其它表达变化的已知基因与癌症发生及恶化有关，包括细胞凋亡、细胞周期及其调控、细胞间信号传递、细胞增殖、代谢、蛋白质的磷酸化及细胞内信号传导等。 表达变化的基因与信号通路间的关系与生物学过程的关系一致。总体上，与细胞调控有关的通路，包括补体相关途径、发育、炎症反应、细胞黏附等多个方面，其中己知与癌症有关的有Jak-STATsignalingpathway，Integrin—mediatedcelladhesion及InflammatoryResponsePathway；与代谢相关的途径主要集中在氨基酸(精氨酸、脯氨酸和色氨酸)、脂肪酸、小分子如类固醇、六氯化苯及氮的代谢等。 表达变化的基因按照分子功能分类，主要有：蛋白结合、金属离子结合、翻转酶、盯P结合、锌离子结合、转录因子活性和DNA结合相关。 表达变化的基因按细胞结构归类，主要有：细胞核，各种膜的结构，细胞质，细胞外结构及内质网等。而在共同表达变化(SLF≥1和SLF≥2)基因的细胞结构分析中，主要为膜结构和细胞外结构。 表达变化的基因按染色体分布归类后，分布最多的染色体是1号和2号染色体，5号染色体也较多。共同表达变化(SLF≥1和SLF≥2)基因的染色体主要分布在2号和5号染色体，其他分布较少。基因在染色体上多为成簇分布，位置接近中间粒的较少，两端和上下臂均有分布。 挑选了变化显著(SLF≥2)的6个基因进行了SYBRGreenreal-timePCR验证。其中表达上调的有：SPINK6，MGCl6471，FN1，PHLDAl和NOTCH3；表达下调的有：Aw451176(简称AW)。六个基因中，Aw与MGCl6471为未知cDNA序列；SPINK6(sennepepttiaseinhibitor，Kazaltype6)为丝氨酸肽酶抑制因子；FN1(纤维粘连蛋白)，在细胞黏附和迁移相关的过程中起重要作用；PHLDAl在胰岛素样生长因子(IGF一1)的抗凋亡过程中有重要作用；NOTCH3主要与细胞间信号通路有关，目前认为可能与CADASIL有关，具体作用仍然未知。有不同的研究证实FN1、PHLDA1和NOTCH3分别与癌症有程度不同的关联，其他基因与癌症的关系还未见报道。结合实验组和对照组的细胞学特性实验(细胞接触抑制和迁移特性的不同等)，我们认为，结果提示这些基因与肝细胞转化、肿瘤发生、癌变等可能存在一定联系。