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目的:抗癌药物能够特异性的靶向癌细胞且对正常细胞没有毒性作用,在癌症的治疗中具有重要的意义。重组猪自然杀伤细胞溶解素(recombinant porcine natural killer lysin,rpNK-lysin)是一种高效的阳离子抗菌和抗肿瘤多肽。本课题主要研究了 rpNK-lysin体外抗肝癌细胞侵袭和转移的作用,并进一步阐明了 rpNK-lysin调节Fascin1和Wnt/β-catenin信号通路的分子机制。方法:采用MTT法测定rpNK-lysin对正常肝细胞(L-02)的最大安全浓度(maximum non-toxic concentration,MNTC)。将上述 MNTC 作为 rpNK-lysin 的最大使用浓度,通过MTT法、划痕试验、黏附试验和侵袭试验分别检测rpNK-lysin对3种不同肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞系(SMMC-7721、97-H 和 HepG2)的增殖、黏附、侵袭和转移的抑制作用。荧光定量PCR和Western blot检测MAPK途径(ERK1/2,SRK2 和 CREB1)调节 Fascin1 的作用及其与 Wnt/β-catenin 信号通路(β-catenin,MMP2和MMP9)的关系。明胶降解测定法(明胶酶谱分析法)测定rpNK-lysin对明胶酶A(MMP2)和明胶酶B(MMP9)的酶活性的影响。结果:1.rpNK-lysin对正常肝细胞的MNTC为90.8μg/mL,在后续实验中,以90.8μg/mL、45.4μg/mL和22.7μg/mL作为使用浓度来研究rpNK-lysin对HCC细胞系的影响。2.MTT、划痕试验、黏附试验和侵袭试验结果显示,rpNK-lysin处理后能够明显抑制HCC细胞的增值、迁移、粘附和侵袭能力,且呈剂量和时间依赖性。3.荧光定量PCR和Western blot结果显示,rpNK-lysin处理后能够明显抑制ERK1/2、RSK2、CREB1、Fascin1、β-catenin,MMP2 和 MMP9 mRNA 和蛋白的表达,抑制 ERK1/2、RSK2和CREB1的磷酸化,且呈剂量和时间依赖性。4.明胶降解试验结果显示,rpNK-lysin处理后显著降低了 MMP2和MMP9的酶活性。结论:rpNK-lysin在体外能特异性的靶向抑制HCC细胞系(SMMC-7721,MHCC97H和HepG2)的增殖、粘附、侵袭和转移能力,其可能通过抑制HCC细胞系的MAPK和Wnt/βcatenin信号通路的激活来发挥抗侵袭和转移作用。本研究的相关结果表明,rpNK-lysin可作为HCC治疗的候选药物进行进一步的研究和开发。