目的:研究小分子化合物短叶老鹳草素对于人肾透明细胞癌增殖及凋亡的影响及其可能的具体作用机制,为肾癌临床药物治疗的可行性提供初步的基础实验依据。方法:1.选取人透明细胞癌细胞株786-o细胞与caki-1细胞,使用不同浓度的短叶老鹳草素分组处理细胞后,使用CCK-8法测量细胞增殖能力。2.使用Hoechst33258染色法观察该两株细胞在药物作用下的细胞核改变及细胞凋亡情况;3.利用流式细胞仪检测Annexin-V-FITC/PI双染色法下药物处理后细胞凋亡率及细胞周期分布的情况。4.应用实时荧光定量PCR法评估不同药物浓度作用下细胞内AKT、BCL-2、BAX m RNA的表达水平。5.采用Western-blot蛋白印迹法测定PI3K,AKT,p-AKT,PTEN,BCL-2,BAX,CDC 25C,Cyclin B1蛋白的表达水平。结果:1.使用CCK-8观察不同浓度(0,5,10,15,20,25,30μg/ml)的短叶老鹳草素处理肾透明细胞癌不同时间(12H,24H,48H,72H)后;结果显示,随着药物浓度的增加,两株细胞的增殖率均有明显抑制,并且随着时间的增加,细胞的成活率显著下降(P<0.05)。我们依据初步结果及相关文献,确定化合物短叶老鹳草素在后续实验的药物浓度梯度为5μg/ml,10μg/ml,15μg/ml。2.利用Hoechst33258染色法在荧光倒置显微镜下观察,实验组较之对照组,可观察到较多凋亡的细胞核形态。同时采用Annexin-V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率,发现两株细胞的凋亡率随着药物浓度而增加(P<0.05)。我们通过实时荧光定量PCR技术得出,BCL-2的m RNA表达量随着短叶老鹳草素的浓度增加而减少,反之BAX的m RNA表达随着药物浓度的增加而增加(P<0.05)。除此之前,我们进一步使用Western-blot技术进一步印证BCL-2与BAX的蛋白表达情况与m RNA的表达情况一致。3.通过流式细胞仪分析发现,实验组较之对照组,G1期细胞比例降低,G2期细胞比例增加(P<0.05),同时利用Western-blot蛋白印迹法测定结果显示,调控周期相关的蛋白CDC 25C,Cyclin B1表达下调。4.Western-blot蛋白印迹法结果提示,实验组对比对照组中PI3K、p-AKT蛋白的表达下调,同时PTEN蛋白表达增加(P<0.05)。由此得出化合物短叶老鹳草素能够通过负性调控PI3K/AKT信号通路从而促进细胞凋亡。结论:化合物短叶老鹳草素能够明显抑制细胞增殖,并且促进人透明细胞癌的细胞周期阻滞及细胞凋亡,其机制可能是通过负性调控PI3K/AKT信号通路,从而达到抗肿瘤作用。