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目的:壳聚糖(chitosan,CS)纳米材料因其具有优良的生物学性能成为肿瘤靶向治疗的常用的递送载体。CD44是透明质酸(hyaluronic acid,HA)的受体,在膀胱癌T24细胞中高表达,制备HA修饰的新型壳聚糖纳米材料包载cy3标记的siRNA(sCSNPsHA),以Bcl-2致癌基因为靶标,转染膀胱癌T24细胞,通过一系列实验证明sCSNPsHA对膀胱癌T24细胞的抑制作用,评价壳聚糖纳米材料作为siRNA递送载体的可行性,为晚期膀胱癌的治疗提供新的思路。方法:利用壳聚糖(CS)和三磷酸纳(sodium tripolyphosphate,TPP)通过离子交联法制备壳聚糖纳米材料(chitosan nanoparticles,CSNPs);然后用CSNPs包载以Bcl-2致癌基因为靶标的cy3标记的siRNA制备成s CSNPs,再将CSNPs及sCSNPs与透明质酸(hyaluronic acid,HA)结合后制备CSNPs-HA及sCSNPs-HA。用激光粒度分析仪连续6天测量CSNPs、CSNPs-HA、sCSNPs、sCSNPs-HA四种材料的平均粒径、分散度(PDI)及Zeta电位以检测其稳定性;并用扫描电镜(scanning electron microscopy,SEM)来观察制备的壳聚糖纳米材料纳米粒表面结构;用分光光度法评估CSNPs及CSNPs-HA对siRNA的包载能力;通过改变CS与TPP的比例、制备温度、超声的频率和时间等条件不断优化壳聚糖纳米材料的制备方法。MTT实验评估壳聚糖纳米材料CSNPs及CSNPs-HA材料本身细胞毒性;用CSNPs及CSNPsHA包载cy3标记的siRNA制备成sCSNPs及sCSNPs-HA转染膀胱癌T24细胞,荧光显微镜观察转染效果、分析荧光数据;用MTT实验及划痕实验分别检测不同组膀胱癌T24细胞的增殖和迁移能力。qRT-PCR法和Western Blot法检测膀胱癌T24细胞中Bcl-2的mRNA水平和相关调节蛋白水平表达的差异,评价包裹siRNA的壳聚糖纳米材料sCSNPs及sCSNPs-HA干扰Bcl-2基因表达的效果。结果:采用最优制备方案得到的壳聚糖纳米材料平均粒径为130nm,分散度小于1,具有较好的分散性;连续6天测得的参数变化不大,表明其稳定性较好。纳米粒在扫描电镜下呈现典型的球形,形态圆润,分散性较好。分光光度法检测壳聚糖纳米材料(CSNPs)及HA修饰的壳聚糖纳米材料(CSNPs-HA)对siRNA有较强的包载能力;MTT实验表明壳聚糖纳米材料CSNPs及CSNPs-HA细胞毒性符合生物医用材料的标准;通过荧光图像、荧光数据证明制备的壳聚糖纳米材料的转染效果优于公认的转染试剂Hiperfect;划痕实验表明sCSNPs-HA组可以明显降低膀胱癌T24细胞的迁移能力;细胞增殖实验表明sCSNPs-HA组可以明显抑制膀胱癌T24细胞增殖能力;qRT-PCR、Western Blot结果表明sCSNPs-HA组对Bcl-2基因在mRNA及蛋白水平表达有明显抑制作用。结论:本研究成功构建了包载cy3标记的siRNA的HA修饰的壳聚糖纳米材料(sCSNPs-HA),采用优化后的离子交联法制备的纳米材料的纳米粒粒径、形态较为理想,分散性好。CSNPs及CSNPs-HA符合生物医用材料的标准,转染效果优于公认的转染试剂Hiperfect,MTT实验及划痕实验证明包载可以沉默Bcl-2基因的siRNA的HA修饰的壳聚糖纳米材料转染膀胱癌T24细胞可以明显降低T24细胞的增殖能力和迁移能力;qRT-PCR、Western Blot表明sCSNPs-HA组对Bcl-2基因在mRNA及蛋白水平表达有明显抑制作用,进而促进肿瘤细胞凋亡,为膀胱癌基因靶向治疗提供新的理论。