目的:1.分析中性粒细胞外诱捕网（Neutrophil extracellular traps,NETs）的表达水平与大鼠肝移植术后肝缺血再灌注损伤的相关性;2.观察重组人血栓调节蛋白（Recombinant human thrombomodulin,r TM）能否通过抑制NETs的形成从而减轻肝细胞凋亡,保护肝功能,缓解肝缺血再灌注损伤;3.探讨r TM对中性粒细胞Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR-4）及其下游相关信号通路的调控作用以及在缓解肝脏缺血再灌注损伤（Ischemia reperfusion injury,IRI）中发挥抗炎、抗肝细胞凋亡的可能分子机制。方法:1.构建大鼠肝移植模型并分离肝移植受者和正常对照组中性粒细胞。采用免疫荧光和酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assy,ELISA）检测大鼠肝移植后外周血清NETs的表达水平;2.肝脏组织苏木素伊红（Hematein Eosin,HE）染色评估r TM干预前后肝移植大鼠的肝损伤情况,微板法监测r TM干预前后肝移植大鼠肝功能变化,实时定量聚合酶链式反应（Quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR）和伊文思蓝染色评估r TM干预前后肝移植大鼠肝脏炎症反应程度和肝血管通透性的变化情况。r TM干预大鼠肝移植模型后,Ki67免疫组化染色、末端脱氧核苷酸转移酶缺口末端标记（Terminal deoxynucleotidyl transferase d UTP nick-end labelling,TUNEL）染色和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡相关蛋白的表达,评估肝细胞增殖和凋亡情况;3.采用Western blot对筛选出的TLR-4及其下游相关通路在大鼠肝移植模型中进行验证,最后采用HE染色、TUNEL染色、伊文思蓝染色以及ELISA,在大鼠肝移植模型中探究r TM和DPI联合治疗对缓解肝移植肝IRI是否具有协同作用。结果:1.随着肝移植术后时间的延长,大鼠肝组织损伤逐渐加重,I/R组大鼠血清天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、总胆红素的表达相较于对照组逐渐升高。免疫荧光结果提示I/R组大鼠中性粒细胞发生NETosis的概率增加,NETs的生成增多。ELISA结果提示,大鼠血清中DNA/NETs和H3cit（NETs相关标志物）的表达量升高;2.大鼠肝移植术后大量中性粒细胞被激活并募集至肝脏,肝IRI伴明显的肝脏炎症反应和血管内皮细胞受损,肝血管通透性增加。免疫荧光结果提示,肝移植受者中性粒细胞相较于健康对照组中性粒细胞发生NETosis的概率增加,NETs生成增多;3.体内和体外实验证实r TM可以通过抑制NETs的形成,促进大鼠肝细胞增殖抑制肝细胞凋亡,保护肝功能从而缓解肝IRI;4.免疫荧光和Western blot结果提示,r TM可以通过抑制中性粒细胞TLR-4/MAPK信号通路以及NADPH-ROS-PAD4信号通路的激活从而减少NETs的形成。脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）（TLR-4受体的激动剂）可以通过激活TLR-4及下游相关信号通路从而部分逆转r TM对NETs形成的抑制作用,以及抗炎和缓解肝IRI的作用。r TM和二苯碘铵（Diphenyleneiodonium,DPI）的联合治疗对于缓解肝移植术后肝IRI具有良好的协同作用。结论:1.大鼠肝移植后NETs生成增多和清除减少可能是大鼠肝移植术后肝IRI的危险因素之一,NETs有潜力成为干预肝移植后肝IRI的有效靶点;2.r TM可能通过调控TLR-4/MAPK和NADPH/ROS/PAD4信号通路磷酸化和激活水平,从而减少大鼠肝移植术后NETs生成,抑制肝脏炎症反应;3.r TM和DPI联合治疗对缓解肝IRI具有协同作用,多靶点、多途径联合治疗可能为肝移植术后肝IRI提供新的治疗策略。