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主要组织相容性复合体(MHC)是广泛存在于脊椎动物体内与免疫功能密切相关的高度多态基因群。研究表明,MHCⅡ类抗原与许多动物疾病的抗病性、感病性密切相关。MHC作为一种内在因子,其变异模式被认为在两栖动物数量的下降中起了关键作用。棘胸蛙(Quasipaa spinosd),又被称为石鸡,是我国棘蛙属中分布范围最广的物种之一,目前主要分布在长江以南地区。人类活动不仅破坏了野生棘胸蛙的生活环境,而且使得野生棘胸蛙资源被过渡开发利用,加之全球变暖引起的疾病传播,导致棘胸蛙种群数量不断下降。为保护棘胸蛙资源,研究与其免疫力有关的MHC基因具有重要意义。为研究MHC等位基因与棘胸蛙对疾病抵抗力的相关性,随机选取100只健康棘胸蛙腹腔注射嗜水气单胞菌(Aeromonas kydropfila)进行人工感染,然后利用特异性引物,扩增47只存活个体(抗病棘胸蛙)和53只死亡个体(易感病棘胸蛙)的MHCⅡB基因,得到了长度为186bp的外显子2序列。挑取出402个阳性克隆进行测序,经序列比对共得到31条不同的核苷酸序列。最终选取6条等位基因用于研究MHCⅡB类基因多态性与棘胸蛙抗病性和易感性之间的关联。选取的6条等位基因虽然同时存在于死亡个体和存活病个体中,但它们出现的频率不同。卡方检验结果显示,等位基因qasp-DAB*h和qasp-DAB*1在存活个体中出现的概率明显高于在死亡个体中出现的概率,它们可能与棘胸蛙对嗜水气单胞菌感染的抵抗性相关；而等位基因qasp-DAB*e则更多的出现在感病个体中,说明其可能与棘胸蛙对嗜水气单胞菌的敏感性相关。抗病个体暂养在养殖场内自然繁殖子代。从子一代中随机挑选150只个体用于研究抗病子一代的抗病性及遗传稳定性。用本实验室分离并鉴定的嗜水气单胞菌、不动杆菌(Acinetobacter Citrobacter)及柠檬酸杆菌(Werkman and Gillen)去感染子一代个体,感染后的存活率分别为90%、84%和80%,其明显高于普通群体的存活率,并且子一代对3种病菌的抵抗力不存在显著性差异。通过测序的方法获得子一代个体的MHC IIB外显子2,得到的多态性序列在亲本中全都存在,并且qasp-DAB*h和qasp-DAB*1在子一代中出现的频率分别为0.56和0.47,明显高于其在普通个体中出现的频率。说明这两个抗病相关基因在子代间是可以稳定遗传的。因此,qasp-DAB*h和qasp-DAB*l可作为分子标记应用于棘胸蛙优良品种的选育中。测定了抗病亲本子一代和普通个体的白细胞数、红细胞数、吞噬细胞的吞噬能力和吞噬指数等免疫相关指标。发现抗病亲本子一代吞噬细胞的吞噬能力和白细胞总数分别为85%和11.5×103要明显高与普通个体。说明子一代个体确实具有较强的免疫力。非特异性免疫是由遗传获得的,子一代个体有可能遗传了亲本的优良性状。