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1、研究背景与目的
在世界大多数国家,鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)发病率极低,但在中国南方部分省市和亚洲东南部一些国家其发病率却很高,其中我国南方的广东省是世界最高发地区,世界人口标化发病率高达男性约30/10万,女性约13/10万。目前大量的研究结果公认遗传因素、EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)感染、环境因素及三者之间的相互作用是鼻咽癌发生的重要病因学模式。鼻咽癌具有显著的地区差异、家族集聚现象和发病率相对稳定等流行病学特征,移民流行病学研究证据和复合分离分析研究结果均提示遗传因素在鼻咽癌的发生发展中具有重要作用。EB病毒感染是鼻咽癌的重要病因,环境致癌因素则伴随着整个发生发展过程。目前鼻咽癌相关基因的研究主要涉及到人类白细胞抗原(Human Leukocyte Antigen,HLA)分子、谷胱苷肽转移酶M1(Glutathione S-Transferase M1,GSTM1)、多聚免疫球蛋白受体(Polyimmunoglobulin receptor,PIGR)、Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)家族基因以及DNA损伤修复基因等,但至今尚未发现一个类似于乳腺癌易感基因BRCA1的主效基因在鼻咽癌的发病过程中起重要作用。2002年本研究小组利用微卫星标记对32个操粤语方言的鼻咽癌高发家系进行全基因扫描及单体型分析将家族性鼻咽癌易感基因定位于8.29CM的4p11-p14区域。2004年Xiong W等将湖南家族性鼻咽癌易感基因定位于3p21区域。细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP)超家族是一类重要的代谢酶基因。其编码的CYP450酶能将无活性的前致癌物代谢转变为具有活性的中间产物,这些中间产物具有亲电子性而且可以与DNA共价结合形成加合物,从而损伤DNA及引起癌基因和抑癌基因的改变,导致癌变形成。CYP2E1酶主要代谢活化一些低分子量的化合物,包括亚硝胺类、黄曲霉素B1、苯并(a)芘、四氯化碳等。CYP1A1酶在烟草前致癌物,如多环芳烃(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons,PAHs)及芳香胺类化合物的代谢活化中具有重要作用。
X射线修复交叉互补蛋白1(X-ray repair cross complementing protein 1,XRCC1)通过其NH2末端及其两个乳腺癌易感基因C末端(BRCT)区分别与DNA聚合酶β、DNA连接酶Ⅲ及聚腺苷二磷酸.核糖聚合酶(PARP)结合形成复合物,在DNA损伤的碱基切除修复和单链断裂修复通路中发挥重要的作用。
编码这些重要功能蛋白的基因上存在许多单核苷酸多态位点,其中一些多态性可能会影响蛋白的结构或生物学功能,从而影响疾病(如肿瘤)的发生发展,甚至影响患者对药物的反应及临床预后。
本研究的目的就是系统地探讨基因CYP2E1、CYP1A1和XRCC1单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)与鼻咽癌易感性的关系,以期找到与鼻咽癌相关联的SNP或SNP单体型,为鼻咽癌的人群筛查、诊断、预防及临床预后提供有意义的分子标记物。
2、研究方法
利用生物信息学方法从国际人类基因组单体型图计划(HapMap)数据库中,获取中国北京汉族人中功能候选基因CYP2E1、CYP1A1和XRCC1及其上、下游各约10kbp-20kbp区域DNA序列内的SNPs数据;运用Haploview软件筛选出能代表上述3个区域内95%以上单体型的标签SNP(Haplotype Tagging SNP,htSNPs)共23个,加上文献中XRCC1基因上最常被报导的3个cSNPs位点,共26个SNPs位点。以457个广府人群鼻咽癌核心家系(每个核心家系由患者和父母或同胞构成)共1919个成员作为研究对象,联合Taqman测序法和PCR-RFLP方法对这26个SNPs位点进行基因分型,其结果使用家系为基础的相关性检验(Family-Based Associmion Test,FBAT)软件进行遗传统计学分析。
3、结果
3.1筛选出的23个htSNPs均位于内含子或非编码区:包括CYP2E1上11个,CYP1A1上6个及XRCC1上6个。加上XRCC1基因上的3个cSNPs分别为:Arg194Trp、Arg280His和Arg399Gln,共26个SNPs位点被分型。
3.2 CYP2E1位点rS3827688等位基因A显著增加鼻咽癌的患病风险(X2=13.450,P=0.001),按VCA-IgA滴度分层(以1:80为界)后,与低滴度组(Z=-1.980,P=0.048)相比,这种危险性在高滴度组中更明显(Z=2.538,P=0.011)。而原本没有关联意义的位点rs9418990等位基因C在低滴度组中显著降低鼻咽癌的患病风险(X2=792,P=0.020)。
3.3 CYP1A1位点rs2472299等位基因A可能增加鼻咽癌的患病风险(X2=4.163,P=0.041)。按VCA-IgA滴度分层(以1:80为界)后,原本没有关联意义的位点rs4886605(C)在低滴度组中显著增加鼻咽癌的患病风险(X2=4.769,P=0.029)。
3.4 XRCC1位点rs3213282(G)和位点rs762507(G)显著增加鼻咽癌的患病风险(X2=4.973,P=0.026和X2=4.017,P=0.045)。按VCA-IgA滴度分层(以1:80为界)后,在高滴度组中这一危险性变得更加显著(X2=5.614,P=0.018和X2=4.330,P=0.038)。而原本没有关联意义的位点rs762506(G)在高滴度组中增加鼻咽癌的患病风险(X2=4.253 P=0.039)。
3.5 单体型分析发现:携带CYP2E1基因单体型“CTGCACAATAC”的人群发生鼻咽癌的危险性显著增高(X2=13.592,P=0.016)。而且这种相关性在血清EBV壳抗原抗体高滴度组(VCA-IgA≥1:80)中变得更加显著(X2=15.983,P=0.007)。而CYP1A1基因单体型在分层前后与鼻咽癌易感性之间均没有显著的相关性。携带XRCC1基因单体型“GGAGCAAGC”的人群发生鼻咽癌的危险性降低(Z=-2.109,P=0.035);而携带单体型“GGAGCGGGG”的高VCA-IgA滴度人群罹患鼻咽癌的危险性可能增高(Z=2.038,P=0.042)。此外,由基因XRCC1与CYP2E1之间构建的单体型“GGAGCGGGG-GCACACGCGGC”和单体型“GGAGTGGGG-CTGCACAATAC”与鼻咽癌易感性之间具有显著的相关性(X2=4.519,P=0.034;X2=4.119,P=0.042),而且在高VCA-IgA滴度组人群中,携带有单体型“GGAGTGGGG-CTGCACAATAC”的个体罹患鼻咽癌的危险性显著增高(X2=7.791,P=0.005)。
4.结论
4.1 CYP2E1基因rs3827688位点G>A变异增加了鼻咽癌的患病风险。含有这个位点危险等位基因A的单体型“CTGCACAATAC”显著增高人群发生鼻咽癌的危险性,而且在VCA-IgA高滴度人群中更显著。
4.2 CYP1A1基因rs2472299位点G>A变异可能增加鼻咽癌的患病风险。在VCA-IgA低滴度组中,rs4886605位点T>C显著增加鼻咽癌的患病风险。
4.3 XRCC1基因m3213282(G)、rs762507(G)和rs762506(G)可能增加鼻咽癌的患病风险,这种危险性在VCA-IgA高滴度人群中更显著。含有这3个位点危险等位基因的单体型“GGAGCGGGg”增加鼻咽癌的患病危险,而且在VCA-IgA高滴度人群中更显著。
4.4由基因XRCC1与CYP2E1构建的单体型“GGAGCGGGG-GCACACGCGGC”和单体型“GGAGTGGGG-CTGCACAATAC”显著增加鼻咽癌的发病风险。后者与鼻咽癌易感性之间的相关性在高VCA-IgA滴度组人群中更显著。