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目的:通过1.在人牙髓细胞培养过程中加入CGF,观察CGF对牙髓细胞增殖和分化的影响;2.使用次氯酸钠、EDTA、氯己定处理根管,观察不同冲洗液对牙髓细胞贴附根管壁的影响;3.观察低氧条件下促红细胞生成素(EPO)对牙髓细胞增殖和分化能力的影响;4.观察CGF用于牙髓血运重建术和传统根尖诱导成形术在年轻恒牙治疗中的临床效果;摸索出牙髓血运重建时影响和保护牙髓细胞的因素及手段,为通过牙髓细胞的增殖及保护提高牙髓血运重建的预后及CGF提高牙髓血运重建的成功率提供实验参考,以期不断提升牙髓血运重建的效果,更好的保留牙髓坏死的年轻恒牙。方法:1.通过改良组织块酶消化法从18岁以下因正畸或阻生需拔除的健康完整牙中分离出牙髓细胞并传代培养。抽取患者静脉血制备CGF凝胶,挤压成膜,剪成3×3mm大小备用。本实验分为四组,实验组在培养基中分别加入1片CGF(低浓度)、2片CGF(中浓度)、3片CGF(高浓度),对照组培养基为仅含10%FBS的DMEM培养基。分别在3、5、7天,通过CCK-8检测CGF对牙髓细胞增殖的影响;碱性磷酸酶(ALP)检测CGF对牙髓细胞分化的影响。2.收集河北医科大学口腔医院颌面外科门诊因正畸拔除的下颌单根前磨牙。高速金刚砂车针开髓,拔髓,在釉牙骨质界处用金刚砂盘截去牙冠。分别使用次氯酸钠(A组)、EDTA(B组)、氯己定(C组)处理根管,纵向剖开牙根,暴露根管壁,截成1mm×1.5mm×1.5mm大小置于75%乙醇15min,PBS冲洗残留的乙醇,然后置于96孔板中,接种牙髓细胞,24h后观察牙髓细胞的贴壁情况,检测CCK-8值。3.低氧条件下实验分为两组,实验组使用含有浓度为20u/ml EPO的10%FBS的DMEM培养基培养牙髓细胞,对照组培养基为仅含10%FBS的DMEM,将培养箱的氧气浓度设定为1%,培养24h、48h、72h后CCK-8检测EPO对牙髓细胞增殖的影响;碱性磷酸酶活性(ALP)观察EPO对牙髓细胞矿化的影响。4.在河北医科大学口腔医院收集2017年3月-2019年12月诊断为牙髓炎或根尖周炎的年轻恒牙14例,根据患者的选择和实际具有的材料,实验组行CGF牙髓血运重建术辅以i Root BP覆盖保护,对照组行传统根尖诱导成形术。所有患牙均符合纳入标准,术后定期复查,通过治疗前后的临床表现及X线片评价治疗的成功率。5.各组数据使用SPSS21.0软件进行统计学分析处理。结果:1.CGF组能够促进牙髓细胞的增殖,并随时间延长和CGF浓度的增加牙髓细胞的增殖能力也增强。CCK-8结果显示第3天实验组和对照组吸光度无明显差异(P>0.05),但在实验第5天、第7天时,实验组与对照组之间有显著性差异(P<0.05)。ALP试剂盒检测结果显示在第七天时CGF组中牙髓细胞的碱性磷酸酶活性明显高于对照组,吸光度之间差异有统计学意义(P<0.05)。2.不同根管冲洗液处理根管并培养牙髓细胞24h后,检测CCK-8值,结果显示在450nm波长下次氯酸钠组吸光度值大于其他两组,且差异有统计学意义(P<0.05)。3.低氧条件下培养牙髓细胞,CCK-8结果显示:与对照组比较,在24h、48h、72h时EPO组CCK-8值均高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。ALP检测牙髓细胞分化能力结果显示:与对照组比较,在24h、48h吸光度值实验组与对照组无明显差异,在72h时,实验组吸光度大于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。4.通过临床病例治疗前后的临床表现及X线片,与对照组相比,实验组采用CGF可以更好的促进牙根的完善发育。结论:1.高浓度CGF能显著促进牙髓细胞的增殖和分化,有提高牙髓血运重建预后的可行性。2.次氯酸钠、EDTA、氯己定三种根管冲洗液比较,次氯酸钠可在牙髓细胞培养时有效的提高牙髓细胞对根管壁的贴附。3.EPO能保护低氧状态下的牙髓细胞,具有促进其增殖、抗炎的作用。4.牙髓血运重建术时,CGF能够对牙根未发育完全的年轻恒牙促进其继续完善发育。