新疆部分地区野鸭源禽1型和4型副黏病毒的分离鉴定及基因组特性分析

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禽副黏病毒(Avain Paramyxovirus,APMV)属于副黏病毒科(Paramyxoviridae)、禽腮腺炎病毒属(Avulavirus),其基因组为不分节段的单股、负链RNA。通过红细胞凝集抑制和神经氨酸酶抑制试验,将APMVs分为14个血清型(APMV-1~14)。其中,禽1型副黏病毒(Avain Paramyxovirus type 1,APMV-1),又名新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV),可引起禽急性、热性、败血性和高度接触性传染病,是世界家禽业的主要威胁;人工感染禽4型副黏病毒(Avain Paramyxovirus type 4,APMV-4)可导致鸡轻度间质性肺炎和卡他性气管炎。本研究采用常规方法处理来源于新疆焉耆县和福海县健康野鸭的泄殖腔拭子和咽拭子样品,接种SPF鸡胚,进行血凝(Hemagglutination,HA)和血凝抑制(Haemagglutination inhibition,HI)试验、F基因的测序以及毒力测定,分离鉴定APMV-1和APMV-4。结果分离到1株APMV-1和4株APMV-4,分别将其命名为NDV/Pintail/CH(XJ)/01/2016、APMV-4/Red-crested Pochard/CH(XJ)/02/2016、APMV-4/Pintail/CH(XJ)/04/2016、APMV-4/Wigeon/CH(XJ)/05/2016和APMV-4/Gadwall/CH(XJ)/06/2016;其致死鸡胚平均死亡时间(Mean death time,MDT)和脑内接种致病指数(Intracerebral pathogenicity index,ICPI)分别为102 h和0.3、120 h和0、120 h和0、120 h和0、120 h和0,表明NDV/Pintail/CH(XJ)/01/2016为弱毒株,其余4株APMV-4无毒。根据GenBank中收录的APMV-1和APMV-4基因组相关序列,分别设计特异性引物,采用RT-PCR法对分离株基因组进行扩增。通过克隆、测序和序列拼接,绘制各基因系统发育树,分析其遗传进化关系。结果表明,APMV-1、APMV-4分离株全长分别为15186 nt和15054 nt,基因组结构顺序均为3’-N-P-M-F-HN-L-5’,符合副黏病毒科的病毒基因组“六碱基原则”,基因组3’端均存在55 nt的前导序列(Leader sequence),5’端分别存在114 nt和17 nt的尾随序列(Trailer sequence),各基因间分别具有1~47 nt和9~42 nt的基因间序列(Intergenic sequence),F蛋白裂解位点分别为112G-R-Q-G-R-L117和116D-I-Q-P-R-F121,与弱毒株特征相符。遗传进化分析表明,APMV-1分离株属于NDV Class II基因II型,与NDV疫苗毒Lasota核苷酸相似性高达99%;APMV-4分离株与APMV-4/mallard/15129/07基因组核苷酸相似性最高,介于96.7%~97.7%之间。本研究采用生物信息学方法分析了野鸭源禽1型和4型副黏病毒的基因组特征及遗传特性,为阐明禽副黏病毒遗传变异规律提供实验数据。
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