目的:采用微测序(minisequenting)方法建立线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)控制区和编码区共21个单核苷酸多态性(SNPs)位点的复合检测方法:为线粒体DNA的快速复合检测及结果解释提供参考依据。方法:从前期课题检测的汉族、瑶族、藏族等民族样本的SNP位点中选择高变SNP位点(频率＞0.2)联合同一个体不同组织检出的异质性SNP位点,建立SNaPshot检测方法并对其进行优化。收集26份组织样本(两个个体,每个个体13份样本,包括血液、心、肝、脾、肺、肾、胰、脑、肌肉、皮肤、指甲及毛发)、2名无关个体样本、日常案件检验中的9份检材以及9份动物样本,采用优化后的SNaPshot检测方法对所有样本进行法医学应用有效性验证:同时对所有样本进行测序,将SNaPshot检测方法与直接测序法的检验结果进行比对。结果:本研究中SNaPshot检测结果与测序结果一致:且SNaPshot检测具有种属特异性、组织同一性等特点结论:SNaPshot可快速检测线粒体DNA的单核苷酸多态性,方便、经济、灵敏度高且自动化程度高,可为法医学应用领域线粒体DNA单核苷酸多态性提供一种便宜的检测方法。