本实验自2006年—2010年期间从山东省各地分离和收集了19个禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)分离株,对其生物学特性和基因型进行研究。根据参考文献报道,设计合成了三对特异性引物分别对分离株的三种主要的结构基因S1、N和M基因进行了扩增,克隆和序列分析,以探究山东省IBV毒株之间以及与参考毒株之间基因的遗传变异情况及系统进化关系,对流行株基因型进行划分,研究其分子生物学特征;并通过SPF鸡胚制备了H120、MA5和491疫苗株和部分分离株的阳性血清,通过鸡胚血清中和试验对分离株的血清型和抗原性变异进行分析,探讨山东省IB流行的背景和情况,并探讨S1基因分型与血清中和试验分型之间的关系。对疑似鸡传染性支气管炎的病料采用常规方法处理后接种9~11日龄的SPF鸡胚,接种鸡胚后,96h内收取鸡胚的尿囊液,并将剩余鸡胚孵化至18日龄观察鸡胚生长状况和鸡胚病变。第一代接种没有或少数鸡胚表现出胚体的生长抑制。盲传2~5代后,发现鸡胚表现出明显的生长抑制、侏儒胚、胚体矮小、发育受阻、胚体弥漫性出血。病毒的鸡胚尿囊液对鸡外周红细胞没有血凝活性。同时与ND弱毒疫苗株LaSota同胚接种时,可干扰ND病毒的增殖。电镜下观察,多数病毒粒子呈球形,有囊膜,表面有疏松排列的棒状纤突,呈现冠状病毒粒子的典型特征,未发现其他病毒粒子的存在。初步诊断该病毒是鸡传染性支气管炎病毒。19个IBV分离株均扩增出目的基因片段,序列比对发现:与疫苗株H120相比,19个分离株S1基因变异程度较大,存在广泛的基因突变和氨基酸替代,多数毒株还存在氨基酸的插入;N基因无碱基的缺失和插入,仅存在核苷酸的突变和氨基酸的替代;M基因除毒株CK/CH/SD09/005插入三个碱基外,其它18个分离株仅存在少数的碱基突变和氨基酸替代。对S1、N和M基因的遗传进化分析结果发现:多数分离株之间核苷酸和氨基酸序列同源性较高,与国内分离株LX4关系较近,是山东省主要的流行株类型,且S1基因、N基因和M基因的进化关系相对平行;而分离株SDWF0608、CK/CH/SD09/005和SDTA06111的S1、N和M基因处于不同的进化分支,推测这三个分离株可能发生了基因重组。鸡胚中和试验结果发现:IBV疫苗株和部分分离株之间仅能发生单向中和试验或能够双向交叉中和的毒株之间抗原相关系数小于25%(属于不同血清型)。8个IBV分离株中,仅有SDWF0608、SDLY0612、SDLY0701 3个分离株与疫苗株H120同属Mass血清型的不同亚型,其它5个分离株与H120和491属于不同的血清型,抗原相关性均低于25%。本研究结果从体液免疫的角度解释了临床上鸡群免疫H120或491疫苗后仍然经常发生IBV感染的原因,也提示山东省目前IBV流行株可能存在多个血清型。结合S1基因序列同源性和抗原相关性结果分析发现分离株SDTA06111与H120同属基因I群,且S1基因核苷酸序列的同源性分别达到99.3%,但是二者抗原相关系数仅18%,不属于同一个血清型;分离株SDLY0612与H120的抗原相关系数最高(70.71%),但是两者S1基因序列的同源性仅78.2%。由此推测S1基因同源性和血清型没有明显的相关性,IBV可能通过少数基因突变导致中和性抗原表位的改变,从而产生新的血清型。综上所述,广泛的基因突变、插入、缺失和IBV毒株间的基因重组是造成山东省IBV毒株变异的主要原因。目前IBV流行株存在多个血清型,必须在全面鉴定这些流行株血清型的基础上进行多价疫苗的研制,对于IB的防控具有重要意义。