血吸虫病是一种重要的人兽共患寄生虫病，其疫苗的研究是防治该病的重要措施之一，但是迄今尚未研制出具有免疫保护力的疫苗。在辐照致弱尾蚴免疫小鼠等动物模型中的免疫机制研究表明，辐照致弱尾蚴诱导所产生的高保护力主要是由CD4<+>T细胞介导的细胞免疫。筛选到上述模型中发挥保护性细胞免疫效应作用的分子或者T细胞表位，是血吸虫疫苗研究可能的突破点之一。基于可靠的免疫信息学实验与理论的反向疫苗学技术不仅可以大规模、高通量的从基因组、转录本组水平筛选候选抗原分子，而且可以节省时间和实验经费，是快速发现血吸虫保护性T细胞抗原或表位的有力工具。 目的：从日本血吸虫转录本组EST序列中筛选出期别差异表达的基因，对其编码蛋白应用表位预测服务器进行表位预测，筛选最优混合表位进行克隆和表达，以备体外淋巴细胞增殖试验和动物免疫试验鉴定其免疫保护效果。 方法：对南方基因中心所测转录本组中的EST序列按照序列在不同期别转录本的数量筛选出期别特异表达和期别高表达的基因，去除已知抗原序列，各期别按照有无信号肽和跨膜结构将EST序列分为：信号肽跨膜结构组、一般序列组(非信号肽跨膜结构)，并对其中的非全长序列利用蛋白组测序结果验证其可读框，去除在蛋白质测序计划中未检测到相应蛋白的EST序列；对所编码蛋白应用表位预测服务器PRED-BALB/c、SYFPEIT、MHCPred、Rankpep分别对I-Ad、I-Ed、I-Ak、I-Ek型MHC分子进行表位预测。每个候选抗原序列以PRED-BALB/c服务器对I-Ak、I-Ek型MHC分子的15肽预测表位打分结果为第一选择条件，以SYFPEITH对I-Ad、I-Ed型MHC分子的核心9肽预测表位打分结果及MHCPred、Rankpep对I-Ad、I-Ed、I-Ak、I-Ek型MHC分子的核心9肽预测表位打分结果为参考，优先选择15肽I-Ak、I-Ek打分一致较高，又具有多个打分较高核心9肽的序列；各期别各组筛选出最优的5条混合预测表位，共40条。选择日本血吸虫童虫期信号肽、跨膜结构组和一般序列组(非信号肽、跨膜结构组)最优15肽表位各5条，每组5条15肽表位间用两个G链接，转化成核苷酸序列，起始端依次加上三个个保护性碱基(CGT)，酶切位点BamHI(GAATTC)、kozac序列(CCGACC)、起始密码子(ATG)、防错位保护碱基(GCT)；末端加上终止密码子(TAA)、酶切位点HindⅢ(AAGCTT)、三个个保护性碱基(CGT)，所得多表位序列mep1(跨膜结构和信号肽组)和mep2(一般序列组)合成后分别连接到克隆载体pUcm-T。酶切目的片段并克隆到原核表达载体pET-28a(+)进行表达，His Bind Resin层析柱进行纯化。 结果：日本血吸虫转录本组8416条EST序列中筛选到在不同期别特异高表达和差异高表达的基因166条。表位预测后，总共筛选出40条最优混合表位，各期别各组5条。双酶切重组载体BL21/pET-28a(+)-mep1，BL21/pET-28a(+)-mep2结果表明，我们成功将目的基因克隆到了表达载体pET-28a(+)；IPTG诱导后 SDS-PAGE电泳结果表明：BL21/pET-28a(+)-mepl表达量很高，而 BL21/pET-28a(+)-mep2没有进行表达，进一步His Bind Resin层析柱纯化得到 BL21/pET-28a(+)-mepl表达蛋白。