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目的:建立一种基于标准曲线定量检测血小板膜糖蛋白特异性自身抗体的流式免疫微球芯片技术新方法,并评价其在原发免疫性血小板减少症(ITP)诊断和治疗中的应用价值。方法:首先将羊抗人IgG多克隆抗体包被在6种不同荧光强度的微球上形成捕获微球,分别与6种不同浓度的人IgG孵育,然后将这6种微球洗涤、混合,加入异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗人IgG多克隆抗体,流式细胞术分析,通过平均荧光强度(MFI)和相应的人IgG水平的比率获得标准曲线。应用抗人血小板GPIX(SZ1)、GPIb(SZ2)、GPIIIa(SZ21)、GPIIb(SZ22)和P-选择素(SZ51)分别包被5种不同荧光强度的微球。待测的血浆标本与正常血小板孵育,将血小板裂解后与包被过抗体的微球混合,再加入FITC标记的羊抗人IgG多克隆抗体,流式细胞术分析,通过标准曲线计算血浆中各抗体浓度。采用上述方法定量检测201例ITP患者,126例非ITP血小板减少患者和207正常健康对照的血浆标本,构建受试者工作特征曲线(ROC)评价该定量方法的特异性和灵敏度,并且与定性流式免疫微球芯片技术测定的结果进行比较。最后跟踪随访8例新诊断的ITP患者,定量分析治疗前后血小板自身抗体浓度变化。结果:定量检测抗血小板GPIX、GPIb、GPIIIa、GPIIb和P-选择素自身抗体,其批内差异值分别为3.54、3.65、4.66、6.43和6.97%,批间差异值分别为10.89、7.57、10.34、6.95和10.72%。ITP组抗血小板GPIX、GPIb、GPIIb、GPIIIa和P-选择素自身抗体浓度分别为92.67±56.41ng/m L、130.68±73.42ng/m L、103.05±47.34ng/m L、114.81±82.76ng/mL和132.95±69.82ng/m L;非ITP血小板减少组分别为59.98±23.46ng/m L、95.32±27.44ng/m L、72.41±20.93ng/m L、74.36±21.15ng/m L和73.29±24.18ng/m L;正常健康对照组分别为52.89±21.27ng/m L、86.28±26.91ng/m L、70.26±23.29ng/m L、69.83±23.23ng/m L和72.29±25.31ng/mL。ITP组五种自身抗体浓度值与非ITP血小板减少组及正常健康对照组存在显著差异(P<0.01)。ROC曲线分析显示,抗血小板GPIX,GPIb,GPIIIa,GPIIb和P-选择素自身抗体用于ITP诊断的Cut-off值分别为95.21ng/mL、139.40ng/m L、110.09ng/m L、111.05ng/mL和122.18 ng/mL,曲线下面积(AUC)分别为0.80、0.70、0.76、0.77和0.79。联合检测5种自身抗体,诊断ITP的灵敏度,特异性和准确度分别为73.13%,81.98%和78.65%,与定性流式免疫微球芯片技术无显著差异(P>0.05)。跟踪随访8例ITP患者,其中4例患者治疗有反应,自身抗体浓度均明显下降;另4例患者对治疗无反应,各个自身抗体浓度变化不一致。结论:成功建立一种新的定量检测血小板膜糖蛋白特异性自身抗体的流式免疫微球芯片技术方法,具有良好的特异性和灵敏度,为ITP疾病的实验室诊断及治疗过程的动态监测提供了一个有力工具。